[理学]分子生物学 第四章 RNA的生物合成 [自动保存的].ppt

多种类别真核外显子与内含子连接序列的比较研究发现，它们有极高的同源性：在内含子的5`交界处有不变的GU和3`界处不变的AG，这些序列也指明了剪接位点。 外显子和内含子边界，即内含子的5`端由称为5`剪接位点的序列标明；内含子3`端由称为3`剪接位点的序列标明。 剪接体 mRNA前体的剪接由剪接体介导，此复合体包含150种蛋白质和5种RNA。此5种RNA包括U1、U2、U3、U4、U5、U6,统称为核小RNA。 每种snRNA长100~300nt，分子中碱基以尿嘧啶含量最丰富，与几种蛋白质形成复合物，这些RNA-蛋白质复合物成为核内小核糖核蛋白。 剪接体就是由这些snRNP形成的巨型复合体，但是在剪接反应的不同时期具体的成分不尽相同，不同的snRNP在不同时间进出剪接体，每种snRNp执行某些专门的任务。 snRNP在剪接中的功能有 识别5‘剪接位点和分支点； 按需要把这两个位点集结到一起； 催化（或协助催化）RNA碱基和连接反应。 rRNA的基因原初转录物的沉降常数为30S，相对分子质量为2.1×106，约含6500个核苷酸，5′末端为pppA。 由于在原核生物中rRNA的加工往往与转录同时进行，因此不易得到完整的前体。 从RNaseⅢ缺陷型大肠杆菌中分离到30SrRNA前体（P30）。 RNaesⅢ是一种负责RNA加工的核酸内切酶，它的识别部位为特定的RNA双螺旋区。16SrRNA和23S rRNA前体为P16和P23。 5S rRNA前体P5是在RNaseE作用下产生的，它可识别P5两端形成的茎环结构。 　P5、P16和P23两端?的多余附加序列需进一步由核酸酶切除。 可能rRNA前体需先经甲基化修饰，再被核酸内切酶和核酸外切酶切割。 不同细菌rRNA前体的加工过程并不完全相同，但基本过程类似。 图7-13 大肠杆菌rRNA前体的加工 A．rRNA前体的加工过程； B．RNaseⅢ的切割位点 　 原核生物rRNA含有多个甲基化修饰成分，包括甲基化碱基和甲基化核糖，尤其常见的是2′-甲基核糖。 16S rRNA含有约10个甲基，23SrRNA约20个甲基。 一般5S rRNA中无修饰成分，不进行甲基化反应。 （三） 原核生物tRNA前体的加工 原核或真核生物中tRNA基因往往成簇存在。 在原核生物中，至少某些tRNA能一起形成操纵子，并由一个启动子转录成一条长的前体RNA链。 例如，T4噬菌体中8个tRNA基因组成一簇。 　 E.coli中已找到两个tRNA基因簇，二者均除tRNA基因外尚含有其他基因。这两个基因簇均含有tRNATyr的基因，故命名： 　①tyrU簇，包括4个tRNA基因，tRNAThr，tRNAGly，和tRNATyr； 　②tyrT簇，则仅包含两个相同的基因，编码tRNATyr。 在每个tRNA基因簇中，唯一的启动子常位于第一个tRNA基因之前。 在最后一个tRNA基因的后面还有编码蛋白质的基因。 在tyrU簇中是基因tutB(编码延长因子EF-Tu的两个基因之一)。 而在tyrT簇中是编码蛋白质P的基因(蛋白质P是一种类似鱼精蛋白的多肽)。 E.coli中参与tRNA加工的酶有： RNaseP：它是一种内切核酸酶，负责切割所有tRNA分子的5’端。 RNaseP是一种不寻常的酶。它由蛋白质和RNA二者组成，分子中RNA有375个碱基长(约130KD)；而蛋白质组分要小得多，大约只有20KD。 Ⅰ型分子有CCA三联体在其3′端。但某些噬菌体编码的Ⅱ型分子则没有CCA序列。当其他碱基被一个一个从前体分子上除去后，另由称为tRNA核苷酸转移酶的将CCA加到3’端上去。 RNaseD：它能从RNA的3′端一个一个地切去碱基，以产生tRNA的真正的3’端(5′端由RNaseP产生)。 RNaseⅡ：有外切核酸酶的活性，它能够将tRNA完全分解完。以前认为它也与tRNA加工有关，但目前认为它可能仅和RNA的分解代谢有关。在细菌中有两种tRNA前体，其区别在于其3端的序列。 （一）真核生物mRNA前体的加工 　　真核生物mRNA前体称为hnRNA，又称类似DNA的RNA(D-RNA)。 在真核生物中，由RNA聚合酶Ⅱ催化