常用蛋白标签-生命奥秘.PDFVIP

原文检索： /info/infoSupplyView.htm?id=50c35b04 1b977f340 11b97c7de673b66 ht t p :/ / w w w . h o p e b i o .c o m/ n e w E b iz 1/ E b iz Po rt a l F G/ p o rt a l/ ht m l/ I nf o C o nt e nt . ht m l ? I nf o C o nt e nt 15 0 _ action=showInfoPublish_ InfoID=c373e90ab872ab868ffaaf9547926 11c Los, G. V. et al. (2005) HaloTag ™ Interchangeable Labeling Technology for cell imaging and protein capture. Cell Notes 11, 2-6. Puck T T, et al. Genetics of somatic mammalian cells III. Long-term cultivation of euploid cells from human and animal subj ects. J. Exp. Med. 108: 945-956, 1958. PubMed: 1359882 1 小词典 小词典 CHO-K1细胞 CHO-K1细胞是实验中十分常用的一个细胞株，在生物制药中的应用也非常广泛。该细胞株培养条件简单，贴壁强度适 中，比较容易转染，很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。 来源：中国仓鼠 （ Cricetulus g riseus ）卵巢 形态：表皮细胞 生长特性：贴壁 CHO-K1由CHO衍生而来，CHO是T. T. Puck 在1957年从一只成年中国仓鼠的卵巢中获得的。 二、常用蛋白标签 1. His-tag——历久弥新的6组氨酸标签 金属螯合亲合层析，又称固定化金属离子亲合层析 （Immobilized metal ion affinity chromatography, [1] IMAC ），是近30年发展起来的一种新型分离技术。最早由Paroth等人提出 。该方法利用蛋白质表面的一 些氨基酸，如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等能和金属离子发生特殊的相互作用的原理，从而对蛋白质加以分 离。这些作用包括配价键结合、静电吸附、共价键结合，其中以配价键结合为主，而且这其中又以6组氨酸 标签 （His-Tag ）应用最为广泛。 以His-Tag纯化标签结合金属螯合亲合层析，为重组蛋白质的分离纯化提供了一个有力的工具。由于金 属螯合亲合层析具有配体简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点，上样条件可选择范围广，在高 盐、一定浓度的变性剂以及去垢剂的条件下，带6His纯化标签的蛋白质都可以和亲合填料特异性结合，逐渐 [2] 成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一 。 1.1 His-tag是蛋白纯化的首选标签 [3] Susanne Graslund等人 在对10,000多个不同蛋白的表达纯化进行总结，认为His-tag是蛋白纯化的首选 标签，主要有五方面的因素 （表9 ）。 表9 His-tag被认为是蛋白纯化的首选标签的五个因素 N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达； 采用固定化金属离子亲合层析纯化His-Tag融合蛋白操作简便； His-Tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响，而不象GST标签那样容易形成二聚体，从而影响蛋白的 特性； His-Tag非常小，不会改变目的蛋白自身的可溶性，相反一些大的标签如MBP，可大大提高融合蛋白 的可溶性，尽管目的蛋白本身是不可溶或者折叠不正确； His-Tag非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白结构没有影响。 2323 生生命命奥奥秘秘ww