[理学]普通遗传学 第一章.pptVIP

07生化 张雪丽 真核生物特殊的染色体作图 分子标记作图 原位杂交作图 分子标记作图 分子标记是遗传标记的一种，遗传标记是一种可遗传变异，是遗传学家的基本工具。 常用的遗传标记可分为：形态学标记、细胞学标记、生化标记和分子标记。 遗传标记必须具备的3个性质：位点专化、在所研究的群体中存在多态性、容易用它进行基因型分析。 分子标记特点 数量多，几乎无限。 不存在同功酶标记所具有的组织`器官和发育时期特异性 不受环境季节等外界条件的影响，准确性高。 分子标记表现为共显性，能区分纯合基因型和杂合基因型。 不存在非等位基因之间的互作等效应 无表型效应，对目标性状的表达不存在影响。 标记的多态性与单肽性 标记的多样性：是指在所研究的群体中具有两种或两种以上的存在形式。比如，第四章香豌豆是严重的花色（红花与字画），划分的形状（常粒于圆粒）就是多态性标记。 单态性：某一基因或位点在所研究的群体中只有一种存在形式，它不能被用于遗传分析。 分子标记的发展 最初的分子标记是20世纪80年代发展起来的DNA限制性片段长度多态性（RFLP）。随着PCR技术的出现，又逐渐形成序列标签位点（STS），扩增酶切片段多态性（AFLP）简单重复序列（SSR），随即扩增片段多态性DNA（RAPD）。单核苷酸多态性（SNP）等分子标记。 几种常见的分子标记技术 Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。 Southern 杂交 通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的方法可以代替Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处，是目前其他方法所不能替代的，如限制性酶切片段的多态性(RFLP)的检测等。 PFLP PFLP是第一种用于研究DNA的标记。此技术中用到的限制性核酸内切酶是一种在特定序列上切割DNA分子的酶，例如，限制性核酸内切酶只在序列 5—GAATTC—3 3—CTTAAG—5 处而不在其他序列处切割双链，即具有序列特异性。 限制性核酸能切酶识别的特异序列称为限制位点。用限制性核酸内切酶消化分子产生的片断成为限制性片段。 RFLP的特点重复性好可靠性高。一般共显性，能区分纯合与杂合基因型个体，是一种广为使用的分子标记。 缺点：步骤繁琐，涉及放射性同位素操作，所需时间见长，亲缘关系近的个体间多态性程度较低。 单核苷酸多态性（SNP） SNP标记是一种双等位标记，在任何一位点都只有两种形式（A-T或G-C）。 SNP的检测可以通过寡聚核苷酸杂交分析来进行。 DNA芯片技术是近几年发展起来的高通量DNA分析技术。通过此法可以一次检测许多ＳＮＰ位点。 分子遗传作图方法 分子遗传作图方法满足的三个条件： 1，用于作图的位点在亲本中必须呈杂合状态。后代才能长生重组基因型。 2，必须能根据后代的表型推断出所对应的基因型，最好能反映出亲本的配子基因型。 3，群体要足够大，才能获得所需的重组类型。基因间距离越小，发生交换的可能性越少，获得充足性所要求的群体越大。 分子标记遗传图谱的应用 分子标记遗传图谱在实际中的巨大作用莫过于将其应用于动植物品种的遗传改良。 原位杂交作图 定义：是指探针直接用于染色体或染色体片断上对应的同源区段杂交结合，杂交结果直接显示出与探针序列同源的区域在染色体或染色体片段上所处的位置。 　　 原位杂交技术的DNA探针可以用放射性同位素标记。但放射性同位素限制了检测的灵敏度和分辨率的同步提高，因为高灵敏度意味着放射性同位素必须具有高辐射能，但当辐射能提高后会因为信号散射导致分辨率降低。 荧光原位杂交（ＦＩＳＨ） ＦＩＳＨ的出现在同步提高灵敏度和分辨率的同时，还可以将用不同发光特性的荧光物质标记的一组探针与单个染色体杂交，同时显示各个探针序列在染色体上的相对位置。 基因组原位杂交（ＧＩＳＨ） 原位杂交所用探针是整个基因组的总DNA则称为基因组原位杂交（GISH） 基因组原位杂交:主要用于检测远缘杂交后代中外源染色体导入情况。 在染色体作图方面，尤其是将遗传图谱转换成物理图谱的时候，原位杂交使用的探针是克隆的DNA片断。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 否 需 否 需 否 是否需要序列信息 中 10-25ng 中 10-100ng 很高 50-100ng 高 50-100ng 高 5-15ng DNA质量要求 显性 共显性