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基础步骤
养菌
1.保存的菌种在培养基上划线
37℃培养24h至长出菌落。
摇菌
无菌试管内加入ml LB培养基，挑取单菌落加入培养基中，37℃，200rpm摇菌感受态细胞
CaCl2 1．前夜接种受体菌，挑取单菌落于LB培养中37摇床培养过夜（约16小时）； 2．取1ml过夜培养物100ml LB培养37℃摇菌2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷； 4．1.5ml菌液至1.5ml离心管冰上冷却10分钟； 5．4下3000 g冷冻离心5分钟； 6．弃去上清，加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟； 7．4下3000 g冷冻离心5分钟； 8．弃去上清，加入100μl预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮； 9．细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15% - 20%甘油）后超低温冷冻贮存备用（－70）。
加入质粒DNA溶液（含量不超过50ng，体积不超过10μl）0μl（稀释）感受态细胞 冰浴40分钟
42℃水浴冰上冷却3分钟。（不含Amp）含Amp的筛选平板
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