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第十三章基因工程 1.教学目的和要求 （1）掌握基因工程的基本原理 （2 ）学习基因工程的基本内容和技术 （3 ）掌握内切酶、连接酶的功能 2.教学重点 （1）掌握基因工程的基本原理和技术 （2 ）学习目的DNA的分离 第十三章基因工程 （Gene Engineering） 在各种酶的作用下，将目的基因的DNA分子与载体DNA分子相 连接，形成重组的DNA分子，以一定的方式导入原无该类分 子的宿主细胞，并使宿主生物变为自然界原来没有并能连续 传代的新生物。 要点： 供体、载体、受体 基因工程分狭义 （上游）：重组、克隆、表达的设计和构 建。 广义 （下游）：表达工程菌的发酵培养和产物的纯化。 目的：DNA扩增，外源基因表达产物，表达调控，改造生物 遗传特性等。 基因工程 限制性内切酶和载体是基因工程的众多理论与 技术基础中最重要的基石。 基因工程的基本步骤可概括为： • 目的基因的获得(基因克隆)； • 目的基因与载体连接(DNA分子重组)； • 重组DNA分子导入受体； • 转化子的筛选、鉴定。 限制性内切酶与DNA连接酶 细菌细胞内特异性降解外源(异源)核酸分子的 核酸酶。其作用： • 特异性降解异源DNA分子( 甲基化修饰差异)； • I类限制酶随机切割双链DNA分子，II类限制酶识 别、切割特殊的回文(对称)序列； • II类限制酶交错切割DNA双链，产生粘性单链末 端。 来源不同、具有相同粘性末端DNA片段在DNA 连接酶的作用下可准确连接成重组DNA分子。 • 通常使用来自T 噬菌体DNA连接酶。 4 重组DNA技术是基因工程最核心的技术。 载体(vector) 常用基因工程载体有常用基因工程载体有：： 用于承载用于承载、克隆、克隆、转移目、转移目 常用基因工程载体有常用基因工程载体有：： 用于承载用于承载、、克隆克隆、、转移目转移目 的基因的基因(DNA片段片段)，能自我，能自我 的基因的基因 片段片段 ，，能自我能自我 细菌质粒细菌质粒(克隆克隆)；； 细菌质粒细菌质粒 克隆克隆 ；； 复制的复制的DNA分子分子。。 复制的复制的 分子分子。。 λ噬菌体λ噬菌体(克隆克隆)；； 在基因克隆时在基因克隆时：将目的片：将目的片 λλ噬菌体噬菌体 克隆克隆 ；； 在基因克隆时在基因克隆时：：将目的片将目的片 段转移到宿主细胞中进行段转移到宿主细胞中进行 段转移到宿主细胞中进行段转移到宿主细胞中进行 柯斯质粒柯斯质粒(克隆克隆)；； 柯斯质粒柯斯质粒 克隆克隆 ；； 复制克隆复制克隆——克隆载体克隆载体；； 复制克隆复制克隆 克隆载体克隆载体；； 穿梭质粒穿梭质粒(克隆克隆/表达表达)；； 在基因导入受体时在基因导入受体时：将目：将目 穿梭质粒穿梭质粒 克隆克隆 表达表达 ；； 在基因导入受体时在基因导入受体时：：将目将目 的片段转移到受体细胞中的片段转移到受体细胞中 的片段转移到受体细胞中的片段转移到受体细胞中 细菌人工染色体细菌人工染色体(克隆克隆/表达表达)；； 细菌人工染色体细菌人工染色体 克隆克隆 表达表达 ；； 并进行使之表达并进行使之表达——转化转化 并进行使之表达并进行使之表达 转化转化