[医学]流式细胞术.pdf

致： 第四军医大学 口腔医学院 流式原理与科研应用 BD公司生物科学部 李雪 2009年4月8日 市场情况 1973年世界第一台商品化的流式细胞仪FACS I 由BD公司 和美国斯坦福大学共同研制成功 1980年北京师范大学引进了中国的第一台流式细胞仪 FACS II BD是全球最大的流式细胞仪生产商和供应商，在全球的 占有率为75%，在中国75% 在全国各大医院和科研院所，大部分为BD公司的仪器， 总计数量已超过1000台， 如：军科院，301等部队医院， 四医大校部及附属临床医院等等 BD Biosciences Immune Function 流式基本概念 流式细胞术的基本概念 • 流式细胞术 （Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快 速、准确、客观，并且能够同时检测快速直线流动状态中 的单个细胞的多项物理及生物学特性，加以分析定量的技 术，同时可以对特定群体加以分选。 • 流式细胞仪 （Flow Cytometer ）集激光技术、电子物理技 术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技 术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。 BD Biosciences Immune Function 流式检测的样本 • 可检测的样本种类多样： 各种细胞（如外周血，骨髓，细针穿刺物，体腔灌洗 液，实体组织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人 工合成微球等 New! 血清、血浆、唾液、培养上清、细胞裂解液 • 样本制备： • 单细胞悬液（天然，机械研磨/消化） 5 7 • 5×10 ～1×10 cells/ml，约0.5～1ml，300目筛网过滤 BD Biosciences Immune Function 流式细胞仪的检测范围 细胞结构 细胞功能 • 细胞大小 • 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 • 细胞颗粒度 • 细胞活性 • 细胞表面积 • 细胞内/外的细胞因子 • 核浆比例 • 激素结合位点、细胞受体 • DNA含量与细胞周期 • 蛋白磷酸化 • RNA含量 • pH值 • 蛋白质含量 • 钙离子浓度 • …… • 膜电位 …… BD Biosciences Immune Function 流式细胞仪的原理 散射光信号 • 当细胞颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束 BD Biosciences 方向同轴的称前向角散射光信号（FSC ）。与激光束垂直的称为 Immune Function 侧向角散射光信号（SSC）。 散射光信号 Right Angle Light Detector αCell Complexity SSC Incident