[工学]02 遗传的物质基础-DNA.pptVIP

DNA携带着两类不同的遗传信息 一类是负责蛋白质氨基酸组成的信息，是以三联体密码子方式进行编码的。 另一类遗传信息是关于基因选择性表达的信息。基因组中大部分DNA序列是用来编码基因选择性表达信息的。这种选择性除了时序调节和环境调控外，某些调控DNA序列还可以与调控蛋白质相互作用而修饰自己的双螺旋空间结构。 决定双螺旋结构状态的因素 氢键 GC之间有三条氢键，AT之间有两条氢键，这是DNA双螺旋结构的重要特征之一，DNA的许多物理性质如变性、复性以及Tm值等都与此有关。 加入尿素或甲酰胺等可以使Tm值显著降低。 碱基堆集力 DNA同一条链相邻碱基之间的非特异性作用力，包括疏水作用力和van der Waal力。 疏水作用力使DNA相邻的碱基有相互堆集在一起的趋势，这是形成碱基堆集力的重要因素之一。 DNA双链中存在大量的嘌呤环和嘧啶环，其累积的van der Waal力是相当可观的，这是形成碱基堆集力的另一个重要因素。 氢键与碱基堆集力的协同作用 已经堆基的碱基更容易发生氢键的键合，相应地已经被氢键定向的碱基更容易堆集。 两种作用力相互协同，形成一种非常稳定的结构。如果一种作用力被消除，另一种作用力也大为减弱。 带负电荷的磷酸基的静电斥力 DNA溶液中的离子浓度降低时，阳离子在磷酸基周围形成的屏蔽作用减弱，使得磷酸基地静电斥力增大，因而Tm值随之降低。所以纯蒸馏水中的DNA在室温下就会变性。 碱基分子内能 温度升高，碱基分子内能增加时，碱基的定向排列遭受破坏，消弱了碱基的氢键结合力和碱基的堆集力，会使DNA的双螺旋结构受到破坏。 总之，氢键和碱基堆集力有利于DNA维持双螺旋结构，而静电斥力和碱基分子内能则不利于DNA维持双螺旋结构。 DNA双螺旋的呼吸作用 配对碱基之间的氢键迅速断裂和再生的过程，成为DNA链的呼吸作用。特别是富含AT的节段更为明显，经常发生瞬间的单链泡状结构。这对于某些特殊的蛋白质与DNA发生反应并阅读DNA链内部储藏的信息具有重要的作用。 5 DNA二级结构的多样性 1953年，Watson和Crick提出的右手双螺旋模型所用的资料来自相对湿度为92％时所得到的DNA钠盐纤维，基本上相当于B型。 除此之外，人们还发现了A构象、C构象、D构象和E构象等右手双螺旋构象以及左手双螺旋的Z构象。 在相对湿度75％以下获得的DNA纤维具有不同于B-DNA的结构特点，称为A构象。DNA-RNA杂交分子和RNA-RNA双链结构均采取A构象。 Z-DNA的形成是DNA单链上出现嘌呤和嘧啶交替排列所造成的，比如CGCGCGCG或CACACACACA。Z-DNA的出现在热力学上是不利的。Z-DNA与基因调节有关。 B-DNA是活性最高的DNA构象，B-DNA变构成为A-DNA后，仍有活性，但若局部变构为Z-DNA后活性明显降低。B-DNA和Z-DNA之间的变构是转录调节的一种模式。 在活的生物体内，不论是DNA的二级结构还是高级结构，都存在一个动态平衡。 二级结构的其他形式 单链核酸形成的二级结构 RNA是主要的单链核酸，RNA分子内部存在部分序列之间的碱基配对，核酸链自身回折配对产生反向平行的双螺旋结构，叫发夹结构（hairpin）。 发夹结构由碱基配对的双螺旋区—茎和末端不配对的环构成。 6 DNA的变性、复性、杂交 DNA的变性 当DNA被加热或在某些试剂（碱、尿素、甲酰胺等）的作用下，配对碱基之间的氢键和相邻碱基之间的碱基堆集力就会受到破坏，DNA由天然状态转变为近似无规则线团构型的过程称为变性，又称为熔解。 常用的DNA变性方法主要是热变性和碱变性方法。pH11.3时，全部氢键都被破坏，DNA完全变成单链的变性DNA。 DNA变性后会引起光吸收的增加，即增色效应。 DNA的复性 变性的单链DNA重新形成双螺旋结构的过程称为复性。复性的条件有两个（1）有足够的盐浓度以消除磷酸基的静电斥力；（2）有足够高的温度以破坏无规则的链内氢键，但又不能太高，一般使用比Tm值低20－25℃ 。 复性的机制 一般认为需要10－20个碱基对，特别是富含GC的节段首先形成一个（或几个）双螺旋核心，这一步叫成核作用。然后两条单链的其余部分就会迅速形成双螺旋结构。绝大部分的复性DNA分子都不是原配的。 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）是一种DNA体外扩增技术，其基本原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，D