原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
试验聚合酶链式反应实聚酶式
实实验二、聚聚合酶酶链式式反应
（（PPolyl merase ChChaiin RReactition, PCRPCR））
黄立华黄立华 副教授副教授、硕导硕导 huanglh@scnuhuanglh@cn
黄群声 高级实验师
实验目的及要求实验目的及要求
掌握：
技术原理
PCR扩增技术的原理扩增技术的原理
技术操作
微量移液器的使用方法
PCRPCR体系建立的基本操作体系建立的基本操作
本次课堂内容本次课堂内容
第一部分：PCR操作
第二部分：PCR原理
实验材料与试剂实验材料与试剂
1、DNA模板(template)：λ 噬菌体的质粒DNA
2、dNTP: 4种dNTP混和物
33 、1010 ××PCRPCR缓冲液缓冲液(buffer):(buffer): 组分如下组分如下::
15mmol/L MgCl
2
500mmol/LKCl
100mmol/L Tris.HCl (pH8.3)
0.1% 明胶
44、引物引物(primer):(primer): 上游引物上游引物 （（M13M13 FF ）），下游引物下游引物 （（M13M13 RR ）（）（见见 “实验指导实验指导”））
6、Taq DNA聚合酶 (Taq polymerase)
PCRPCR的基本步骤的基本步骤
11、PCRPCR反应体系的建立反应体系的建立
取0.2ml的薄壁离心管，按表1顺序加入试剂→稍混匀，短暂离心把
溶液甩至管底。
2、、PCCR的变温程序的变温程序 （（热循环反应热循环反应））
按表2设置PCR反应的变温程序→把离心管放进PCR仪进行扩增→
反应结束后低温保存或检测反应结束后低温保存或检测
3、PCR扩增产物的电泳检测 (下次实验)
PCR的基本步骤本步骤
1、PCR反应体系的建立
取取00.22mll的薄壁离心管的薄壁离心管，按按表表11顺序加入试剂顺序加入试剂→稍混匀稍混匀，短暂离心把溶液甩至管底短暂离心把溶液甩至管底。
表1 PCR 反应体系
试剂标记 成份 体积(μl) 5管
H ddH O 37.7
2
DD dNTPdNTPs (2(2.55mMM each)h) 44
P1 引物1 （10uM） 1
P2P2 引物引物22 （（1010uMM）） 11
λ λDNA 1
BB 1010 ××反应缓冲液反应缓冲液 55 2525
Taq DNA聚合酶 0.3 1.5
总体积总体积 5050
表2 PCR反应的变温程序
2、PCR的变温程序 反应 循环
温度 持续时间
阶段 数
（（热循环反应热循环反应）） 94
文档评论（0）