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第一章 基因工程 第一节 基因工程概述 一．基因工程的概念 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 由于基因工程是在 水平上进行操作,因此又叫做 。 二．基因工程的基本工具 （一）“分子手术刀”—— （简称 ） 1．来源：主要是从 中分离纯化出来的。 2．功能：能够识别双链DNA分子的某种 的核苷酸序列，并且使每一条链 中 部位的两个核苷酸之间的 断开。 3．结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 和 。 （二）“分子针线”—— 1．分类：根据酶的来源不同，可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类 2．功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的 。 ★两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使 之间连接； T4DNA连接酶能缝合 ，但连接平末端之间的效率较 。 ★DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 不同点 连接的DNA 链 链 模板 模板 模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成 化学本质 蛋白质 (三) “分子运输车”—— 1.载体具备的条件： ①能在受体细胞中 并 ； ②具有一至多个 ，供外源DNA片段插入； ③具有 ，供重组DNA的鉴定和选择。 2.基因工程常用的载体有： 、 和 等。 最早应用的载体是 ，它是细菌细胞中的一种很小的双链 DNA分子。 三．基因工程的基本过程 (一) 获得目的基因（目的基因的获取） 1.获取方法主要有两种：①从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。 ②用人工的方法合成。 ★获得原核细胞的目的基因可采取 ，获取真核细胞的目的基因一般是 。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 2.利用PCR技术扩增目的基因 （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理： （4）过程：第一步：加热至90～95℃ ； 第二步：冷却到55～60℃， ； 第三步：加热至70～75℃， 。 （5）特点：指数形式扩增 (二) 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建） 1．重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有 。 ★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有 ，从而将 筛选出来。 2．方法： 限制酶分别切割载体和目的基因，再用 把两者连接。 (三) 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞） 1.转化的概念：是 进入受体细胞内，并且在受体细胞内 和 的过程。 2.常用的转化方法： ①将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 介导转化技术（ 转化法），其次还有 介导转化技术（ 法）和 技术（ 法）。 ②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 技术。此方法的受体细胞多是 。 ③将目的基因导入微生物细胞： 法。 (四) 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定） 1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否 ，方法是采用 技术。 2.其次还要检测目的基因是否 ，方法是采用