云杉针叶三磷酸腺昔酶活性的超微细胞化学定位-遗传.PDFVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)19(1):26--271997 云杉针叶三磷酸腺昔酶活性的超微细胞化学定位① 贾敬笃 陈正华 陈 晓 松 （中国科学院遗传研究所．北京 100101) 北（京师范大学生物系．北京．100875) 摘 要 用磷酸铅沉淀技术研究了云杉幼龄针叶及成龄树针叶细胞的三磷酸腺昔酶(ATPase)活性定位 ‘ 从形态结构上可以看到，种子萌发的幼龄针叶细胞的细胞壁较薄，ATP酶活性反应产物磷酸铅颗粒主要 分布于细胞质和细胞质膜上。成龄针叶细胞壁较厚，内质网等细胞器发达，ATP酶主要在细胞壁有较高 的活性反应 两者细胞的液泡及细胞核中也有少量定位。幼龄针叶ATP酶活性较成龄针叶的活性较弱， 这种活性变化与不同发育时期叶的生理功能有关． 关健词 云杉，超微结构定位，针叶 TheUltracytochemicalLocalizationofATPaseActivity intheNeedleLeavesofSpruce JiaJingluan ChenZhenghua (instituteofGenetics,TheChineseAcademyofSciences,Beijing100101) Chen Xiaosong (DepartmentofBiology,BeijnigNormalUniversity,Beijing100875 云杉P（iceaasperataMast)为松科云杉属植物，是我国分布较广的重要林木树种，为适应大量绿化造林，通过 生物技术改良和利用已是当务之急。云衫为种子繁殖，需时长而且缓慢，而建立一种优良的体细胞无性系又受到细 胞再生能力的影响，特别是受多年生的幼龄和老龄型的影响很大。ATP酶是植物发育中生理代谢的一项重要指标 为揭示其幼龄老龄的差异，以及为体细胞无性繁殖的适合期选择提供一个指标，本文通过电子显微镜对云杉针叶 的ATP酶进行了研究，比较了云杉不同发育时期针叶的ATP酶活性定位、并观察了针叶的超微结构，以期为杉木 的育种及开展高技术提供基础资料． 1材 料 和 方 法 本工作使用的实验材料云衫属(PiceaDietr)的云杉(P（.asperataMast 幼叶系种子萌发的小叶丛，成龄针叶 为40龄树当年新生针叶叶丛的针叶，采自中国林业科学院林业科学研究所院内． 取新鲜材料清洗后，切成O.lm耐的小块，用50mmol/L二甲砷酸缓冲液p（H7.2)配制的2.5％的戊二醛和 4％的多聚甲醛混合液固定2-4小时，用pH7.2的二甲砷酸钠缓冲液洗2次，再以50mmol/LTris一顺丁烯二酸 缓冲液(p（H7.2)洗3次，每次1小时，然后在22℃的酶反应液中培育2小时． 酶反应液 的成份为 ：50mmol/LTris一顺丁烯缓 冲液 (p（H7.2)中含有 ATP(钠盐)）2mmol/L, Pb(NO,)Z3.6mmol/L,Ca(N03)22mmo1/L。对照反应液为反应液中不加底物ATP和反应液中加人抑制剂 ①本课题为国家自然科学基金资助的重点项目． ！期 贾敬莺等：云杉针叶三磷酸腺昔酶活性的超微细胞化学定位 77 NaF.酶反应后，用 50mmol/L二甲砷酸缓冲液 p（H7.2)洗 2--3次，每次 30分钟，在 1％的饿酸中用（ 50mmol/L二甲砷酸缓冲液配制）固定2-4小时或过夜。重蒸水洗涤3-4次，每次30分钟，然后经过系列乙醇 脱水后包埋于Spurr胶中，超薄切片后进行观察。文中ATP酶是以磷酸铅沉淀颗粒多少来显示酶的活性及分布定 位 ‘ 2结 果 2.1ATP酶在云杉针叶细胞中的分布 观察表明，ATP酶在云杉针叶细胞 内活性明显，但不同龄材料的超微结构和ATP酶定位有所不同。酶反应颗 粒均匀分布，在不加底物和加抑制剂氟化钠的两个对照样品中，未发现有磷酸铅沉淀颗粒 图（版1,2)，说明ATP酶 活性反应是可靠的。在云杉针叶叶肉细胞及维管束组织细胞 内有较高的ATP酶活性存在，ATP酶反应产物分布 于细胞