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2018-02-19 发布于浙江
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[高等教育]基因工程原理与技术05

专题5 PCR技术及其应用 oPCR技术原理和工作方式 oPCR产物的克隆 oPCR扩增未知DNA片段 o与反转录相关的PCR oPCR产生DNA指纹 o实时定量PCR PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 5.1 PCR技术原理和工作方式 5.1.1 PCR的基本原理 ⒈基本要素和扩增原理 o 待拷贝的DNA称为模板，它可以是双链DNA也可是单链DNA，最后扩增得到的产物是双链状态的。在PCR 扩增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA聚合酶在dNTP等底物存在时在引物的引导下沿着模板DNA合成互补的DNA链。 o 图: PCR扩增前4轮产物的增长过程，每一轮包括3个步骤（变性、退火和延伸），从中可以看出PCR的整个扩增进程。 o See: flash PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建模板DNA 目的产物所占比例 0 第一轮延伸 PCR扩增反应原理图第二轮延伸 1/4 第三轮延伸 1/2 第四轮延伸 11/16 PDF 文件使用 pdfFactory Pro 试用版本创建 ⒉PCR扩增的步骤 o 变性（denaturation ）：将模板DNA置于92-96℃，使 dsDNA在高温下解链成为ssDNA，且热变性不改变其化学性质 o 退火（annealing）：将温度降至37-72℃，使引物与模板的互补区相结合 o 延伸（extension ）：在72℃条件下，DNA聚合酶将 dNTP连续加到引物的3 -OH端，合成DNA。 o 这三个热反应过程的重复称为一个循环，经过20-40个循环可扩增得