红曲霉RNA的提取方法.pdf

维普资讯 第2O卷 第 2期 江 西 科 学 V01．2O No．2 2002年 6月 JlANGXl SCIENCE Jun，2002 文章编号：1001—3679(2X()2)02—0118—03 红 曲霉 RNA的提取方法 汤祖辉 ，赖卫华，许 杨 (江西一OAI联合研究院 南昌 330047) 摘要：采用异硫氰酸胍和 巯基乙醇联合变性，酚，氯仿和异戊醇抽提的方法，对红曲霉总RNA进行提取。 得到的RNA样品经过 甲醛变性凝胶电泳和紫外分光光度法检测，证实为完整、均一的总RNA，为构建红曲霉 的cDNA(complemetaryDNA，互补DNA)文库和筛选差异表达的基因奠定了基础。 关键词：红曲霉；RNA提取；异硫氰酸胍 中图分类号：Q781 文献标识码 ：A MethodforIsolationofRNAFrom Monascus TANG Zu—hui，LAIWei—hua，XU Yang (Jiang)d—OAI，Nanchang330047PRC) A ct：ThemethodwasestablishedforRNA isolationfrom Monascususingguanidinium isothiocyante andpmercaptoethanolfordenaturing，thenusingwater-saturedphenol，chloroformandis~nylaleoholeofr extracting．TheintegrityandpurificationofthetotalRNA isolatedareeligiblebyusingformaldehyde-a— garosegelelectrophoresisandUV speetmphotometer，SOitisavailableUStoconstructcDNA libraryofrthe totalRNA andeventoscreendifferentialexpressedgenes． Keywords：Monascus，RNA isolafion，Guanidiniam isothiocyante 尽管在 目前 RNA的提取方法 已是一种很成 表达的基因奠定了基础。 熟的技术，但有关红曲霉 RNA的提取方法 目前还 1 实验部分 未见报道。这是由于 RNA容易降解，不同实验材 料的RNA提取方法又各有所异 1【．2j而造成的。红 1．1 实验材料 曲霉富含 RNase(RNA酶)，又含有大量的多糖，这 红曲霉菌株AS3．4384在土豆葡萄糖培养基 给RNA的提取增加了一定的难度。本研究在参 中，28℃振荡培养(150r／min)16d。 考多种 RNA提取方法的基础上，采用异硫氰酸胍 1．2 实验试剂 和 巯基乙醇联合变性，酚，氯仿，异戊醇多次抽 (1)变性匀浆液 4mol／L异硫氰酸胍，42 提 ，使 RNA留在水相而DNA和蛋白质进入有机 mmol／L柠檬酸钠， =0．83％(W，／、，)十二烷基肌 相，然后用异丙醇沉淀 RNA，得到了高质量的、完 氨酸钠 ，0．2mol／L 巯基乙醇(其 中 巯基 乙醇 整的RNA，为构建红曲霉的cDNA文库，筛选差异 在使用前加入)； 收稿 日期：2001—11—19；修订13期：