[医学]2010年第三章紫外分光光度法第一次.ppt

第一篇 光学分析法 案例 黄骠猪 内容 紫外—可见 荧光 原子吸收 教学要求: 1、熟悉光的电磁性和电磁波谱 2、掌握紫外—可见光的应用范围 3、了解紫外—可见光谱与分子结构的关系 重点：紫外—可见光的范围及光吸收的选择性 第三章 紫外—可见分光光度法 第一节 基本原理 紫外—可见分光光度法（ultraviolet—visible spectrophotometry UVS），是光谱法（spectroscopic analysis）中的最重要的一种分析方法。 一、电磁辐射与电磁波谱 光是一种电磁波（electromagnetic radiation） ，整个电磁波包括： 光子的能量与波长的关系为： 紫外——可见光区光子的能量和波长的关系见下表： 每个电子能级含有若干个振动能级，每个振动能级含有若干个转动能级。分子吸收能量具有量子化的特征，分子电子间的能量差为1—20eV，主要位于紫外—可见光区，紫外—可见光谱即是分子发生电子能级跃迁时产生的吸收光谱。 几个名词： 吸收峰(absorption peak)、 最大吸收波长（maximum absorption waveength）、 肩峰（shoulder peak）、 末端吸收（end absorption）。 吸收光谱的特征（形状、ε、λmax） 醛、酮和羧酸中C=O双键同C=C双键的共轭作用也会降低?*的的能量，从而使n→?*和?→?*跃迁的吸收峰都发生红移。如巴豆醛CH3CH=CHCH=O乙醇溶液的吸收光谱在220 nm处有一个由?→?*跃迁产生的吸收峰和在322 nm处有一个由n→?*跃迁产生的吸收峰。 * * 紫外可见分光光度法（吸收光谱法）是根据溶液中物质的分子或离子对紫外（200—400nm）——可见光谱区（400—700nm）的辐射能的吸收来研究物质的组成和结构的方法。仪器为紫外—可见分光光度计（ultraviolet—visible spectrophotometer） 它是光谱分析的一种。具有较高的灵敏度和准确度，检出限可达10-7g/ml，相对误差通常为1%～5%。该方法仪器设备简单、操作方便、易于掌握和推广，是常用分析方法之一。 无线电波 微波 红外光 可见光 紫外光 X射线 ? 射线 光具有波粒二象性，即波动性和粒子性。 波动性：折射、衍射、偏振及干涉等性质。粒子性。 粒子性：具有动量，光电效应。 能量 J或eV Planck常数 6.626×10-34 J·s 频率，Hz 光速 2.998 ×108 m/s 波长 nm 1eV=1.602 ×10-19 J 式中，h和c都是常数， 可见，光的能量与波长成反比。波长愈长，能量愈低；波长愈短，能量愈高。 1.63 2.07 2.48 3.10 4.13 6.20 E（eV ） 760 600 500 400 300 200 ?（nm） 电磁波谱按能量不同可分为： 无线电波 1～1000 m 微波 10-3～1 m 红外 0.76～1000 ?m 可见 400～760 nm 紫外 10～400 nm 近紫外200～400 nm 远紫外10～200 nm X射线 0.01～10 nm 本章重点讨论 二、 紫外—可见吸收光谱 1、紫外—可见吸收光谱的产生 当辐射通过气态、液态或固态物质时，物质分子性质的吸收辐射，产生紫外—可见吸收光谱，又称分子吸收光谱。 物质分子内部有三种运动，即电子绕原子核的运动、原子在其平衡位置上的振动及分子整体绕其重心的转动。三种运动对应三种能级，即电子能级、振动能级和转动能级。 实际上紫外—可见光谱包含了电子跃迁、振动能级跃迁和转动能级跃迁。 物质对光的选择性吸收 如果光的能量恰好与物质分子的某一能级差相等，这一波长的光即可被分子吸收，从而使分子从基态跃迁到激发态。 这就是说，并非任一波长的光都可以被某一物质所吸收。由于不同物质的分子组成和结构不同，它们所具有的特征能级也不同，能级差当然也不同。物质只能吸收与其分子内部能级差相等的光，所以物质对光的吸收具有选择性。 2、紫外—可见吸收光谱及特征 测定某一溶液对紫外—可见光区不同波长单色光吸光度（A），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘制的图为紫外—可见吸收光谱（absorption spectrum）或吸收曲线（absorption curve） 吸收峰 谷 肩峰 末端吸收 分子吸收光谱的形状取决于分子的内部结构，不同分子的内部结构不同，因此，分子吸收光谱是物质定性的依据。 三