血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌基因组文库的构建.pdfVIP

中国动物传染病学报 2010，18(6)：38—42 · 研究论文 · 血清 Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌 基 因组文库的构建 林树乾，何元龙，赵增成，李 峰 (山东省农业科学院家禽研究所，济南 250023) 摘 要：为研究血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌的抗原基因，筛选毒力较强的血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌菌株，提取其 基 因组，分别用Sau3AI酶切法和 shotgun法对基 因组进行处理后 ，选取 1．5～3kI)的DNA片段 ，与 PUCI18载 体连接后电转化JM109大肠杆菌感受态细胞，构建血清 Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌基因组文库。两种方法得到的库 容量分别为40000和50000左右，随机挑选阳性克隆鉴定表明有外源DNA片段的插入，说明建库成功。该文 库的成功构建为 Ⅱ型鸭疫里默 氏杆菌新的抗原基因的筛选奠定了基础。 关键词：鸭疫里默 氏杆菌；基因文库；构建 中图分类号：$858．322．618：Q785 文献标识码：A 文章编号：1674—6422(2010)06—0038—05 CoNSTRUCTIoN oFGENoMIC LIBRARY OF Ii!珏 昆E A A- ES E冠 SERoTYPE II LIN Shu—qian，HE Yuan—long，ZHAO Zeng—cheng，LIFeng (PoultryInstituteofShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250023，China) Abstract：ThegenomiclibraryofavirulentRiemerellaanatipestfierserotype Ⅱwasconstructedtoidentifytheprotective antigens．ThegenomicDNAwasdigestedwithrestrictionendonucleaseSau3A Iandcutintopiecesbyshotgunmethod．These DNArfagmentswiththesizefrom 1．5to3kbwereligatedintotheplasmidvectorPUC118．Then，therecombinantplasmidwas transformedintoE．coliJM109byelectroporationtoconstructthegenomiclibrarywiththecapabilityabout40000and50000． TheinsertionofexoticDNA fragmentswasconfirmedbyPCR thatamplifiedpositiveclonesfrom random selectedsamples． Keywords：Riemerellaanatipestife genomiclibrmT；construction 鸭疫里默 氏杆菌 (Riemerellaanatipestfier， 主要抗原外膜蛋 白的OmpA(热修饰蛋白)基因； RA)引起的鸭传染性浆膜炎是造成养鸭业经济损 Crasta 等从基因组文库 中筛选到环磷酸腺苷 失最严重的传染病之一 ¨。由于 的血清型众 (cyclic adenosine monophosphate， CAMP) 多，已报道有 25种血清型 ，且各个血清型之 cohemolysin抗原；齐冬梅 和朱德康 分别构建 间无交叉免疫性，使得常规疫苗在临床使用过程 了血清 I型 ／CA的基因组文库，并筛选到完整的 中受到局限。因此，通过构建基因文库进行抗原 ORF抗原性基因。程安春等 对我国 ／CA主要流 基因筛选，研制基因工程疫苗和核酸疫苗成为控 行血清型的调查表明，血清 I、Ⅱ型础 是引起我 制 的发展方 向之一。Subramaniam等 建立 国鸭发病的主要流行血清型，