超低温冷冻保存种质和人工种子.pptVIP

9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.2 人工种子 9.2.3 人工种皮的研制 外植体的选择与灭菌 愈伤组织诱导 体细胞胚的诱导 体细胞胚的同步化 体细胞胚的分选 体细胞胚的包裹（人工胚乳） 外膜包裹（人工种皮） 贮藏 发芽成苗试验 体细胞变异程度与农艺研究 人工种子制作的主要程序 关键：诱导出高质量的体细胞胚； 人工种皮材料的选择；人工种子的贮藏一直是研究中的主要难点之一。 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.2 人工种子 9.2.3 人工种皮的研制 9.2.3.1 对人工种皮的要求 （1）人工种皮对胚状体不可有毒害作用。 （2）人工种皮不仅要柔软，还要能抗压。经得起种子生产中的压力运输中的挤压和适于机械播种的压力等。 （3）必须含有植物发芽，生长所需的营养要素和植物激素。 （4）必须含有农药，以防止播种后土壤微生物的侵染。 （5）人工种皮要求播种后易于化解。 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.2 人工种子 9.2.3 人工种皮的研制 9.2.3.2 人工种子包裹材料的选择和包裹方法 1、包裹材料的选择。 为了选择适宜的包裹材料，美国植物遗传公司Kieth Redenbaugh (1986，1988)对十几种凝胶，如琼脂、琼脂糖、藻酸盐-明胶、淀粉、动物胶、角叉胶、角叉胶-刺槐豆胶、阿拉伯树胶、果胶、蛋白胶、黄芪胶等种类及浓度进行了筛选。同时还对这些凝胶相对应的络合物种类及浓度进行了筛选。 * * 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 教学目的与要求 深入了解植物种质离体保存的类型与特点；了解超低温保存的特点与方法；植物种质低温保存的基本技术操作。 了解植物人工种子的概念与发展概况；掌握植物人工种子繁殖体的培养技术；了解不同繁殖体的人工种子特点与制备方法。 Chapter 9 Cryopreservation / In vitro Germplasm Preservation and Artificial Seeds 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.1 超低温冷冻保存种质 9.1.1 种质保存的意义 植物种质（plant germplasm）资源是育种、开发利用以及科学研究的重要物质基础，世界各国非常重视植物种质资源的考察、搜集、保存及开发利用。植物种质保存(preservation of plant germplasm)一般有2种方式，即就地保存(in situ conservation)与迁地保存(ex situ conservation)。迁地保存是通过建立植物园、种子资源圃、种子库、离体保存等方法实现。植物离体保存(in vitro preservation)主要是将离体培养的植物细胞、组织、器官或试管苗，保存于人工环境下，抑制其生长，达到长期保存的目的。 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.1 超低温冷冻保存种质 9.1.2 种质保存的发展概况 最早，人们利用离体培养技术是将种质保存在试管内。具有的优点是： 只要较少的空间就能保存大量的用无性系方法繁殖的植物 不受病虫害的侵染 不需要经常对植物进行分株和修剪 需要的时候，可把所保存的材料用作核心原种迅速繁殖大量植株 可以将这些不带已知病毒和病原菌的植物在国际间交换，减少可植物检疫的限制。 不过，通过连续继代进行保存，也使材料受到微生物污染和人为错误造成损失的危险。因此一项基本的要求是把继代的次数减少到最低限度。其途径有3种：即超低温保存、低温保存、低气压和低氧压保存。 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.1 超低温冷冻保存种质 9.1.2 种质保存的发展概况 9.1.2.1 低温干燥法 即减少植物种子含水量，同时利用低温干燥环境，来延长种子寿命的方法。该方法是目前保存种质最通用的方法。 9.1.2.2 减压贮藏法 降低氧压，以抑制种子呼吸来延长种子寿命。由于对贮藏设备要求太高，该方法尚未普遍推广。 当前国内、外研究和应用保存种质的方法有如下几种： 9 超低温冷冻保存种质和人工种子 9.1.2.3 冷处理保存法 人们受到医学上保存皮肤和精子的启迪，试图利用冷处理(4℃左右)的方法，以降低植物细胞的代谢水平，来探索保存无病毒茎尖分生组织和愈伤组织。此法不仅收效不大，反而出现不少问题。 (1)常发生染色体、基因组和基因水平上的变异，使培养细胞的遗传性状不稳定。 (2)一些植物种类，经较长时间低温保存，丧失形态建成能力。 (3)经冷处理后，一些培养细胞的次生代谢物质含量下降：如人参皂甙含量高的单细胞株；洋地黄强心甙转化能力强的单细胞株经长期保存，合成能力下降，收不到理想效