叶绿素的提取及叶绿素铜钠的合成与测定.docVIP

单位： 班级： 实验操作人： 实验同组人： 实验地点: 指导老师： 实验操作时间： 叶绿素的提取及叶绿素铜钠的合成与测定 一、实验目的 1．分析叶绿素铜钠的纯度，计算产率。 2．从绿色植物中提取叶绿素并算提取率。 3．利用光谱技术对合成的叶绿素铜钠进行初步表征 4．初步研究用叶绿素合成叶绿素铜钠的条件 二、实验原理 叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素，它与蛋白质结合存在于植物的叶和绿色茎中，是植物进行光合作用的催化剂。叶绿素难溶于水，易溶于有机溶剂。 通常说的叶绿素是指由多种含镁卟啉化合物共存的混合物，有a,b两种 R=CH3者为a型 R=CHO者为b型 叶绿素一旦离开活性植物体，就很不稳定，；把叶绿素转化为叶绿素铜钠盐，就解决了上述问题。叶绿素铜钠盐也有a，b型。 b 型中的—CHO在多步反应中易被氧化，以钠盐形式存在。 将蚕沙中萃取的叶绿素粗品（无溶剂物称糊状叶绿素），经皂化、置铜、纯化和成盐等几步后，就可得出叶绿素铜钠盐成品。 鉴别叶绿素铜钠盐的纯度要看它的吸光度（E1%1cm405nm），在规定条件下，吸光度值大，叶绿素铜钠盐含量高。其中E1%1cm不低于568。 利用多波长分光光度法对产品叶绿素铜钠进行初步表征。测定叶绿素铜钠质 量的三项指标：吸光度比值、游离铜含量、干燥失重。 a和叶绿素b分子式如下： 叶绿素与碱发生皂化反应： 叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合，环上是双羧酸的酯，一个被四所酯化，另一个被叶醇基所酯化，故可以发生皂化反应生成钠盐： C55H72MgN4O5 + 2 NaOH C34H30O5N4MgNa2 + CH3OH + C20H39OH 在酸性介质中，叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿素酸： C34H30O5N4MgNa2 + 4 H+ C34H34O5N4 + Mg2+ + 2 Na+ 叶绿素酸可与铜盐加热条件下生成叶绿素铜酸析出，将叶绿素铜酸溶于丙酮，再与碱反应就生成叶绿素铜钠盐： C34H34O5N4 + Cu2+ C34H34O5N4Cu + 2 H+ C34H34O5N4Cu + 2 NaOH C34H34O5N4CuNa2 + 2 H2O 蚕粪叶绿素铜钠盐的光谱特性 蚕粪叶绿素铜钠盐水溶液在360~700之间有2个吸收峰在波长440处有一最大吸收峰,其吸光度为114;在630处有一较小的吸收峰,其吸光度为017在波长440的吸收峰为叶绿素铜钠盐特有,而在630处的吸收峰为叶绿素特有,叶绿素铜钠盐的含量约是蚕粪中叶绿素含量的2倍，所以试验中均采用440的波长测定叶绿素铜钠盐的稳定性。下图是蚕粪叶绿素铜钠盐的光谱特性［5］。 本实验采用稀碱性溶液从蚕沙中提取叶绿素. 成分分析方法：叶绿素酸铜钠含量、产品酸碱度、产品干燥失重、游离铜均按GB 3262－82中规定方法进行测定。 三、仪器和试剂 （一）、试剂： A、叶绿素铜钠合成 101.3g干竹叶，95%乙醇(600)，5%固体NaOH，浓盐酸，丙酮，500-600mL石油醚，CuSO4 ，蒸馏水，40%乙醇 ，5%NaOH水溶液 ，5%NaOH-乙醇溶液 ，温度计 B、叶绿素铜钠质量分析 1、磷酸盐缓冲液（pH=7.5） 取0.15mol/L磷酸氢二钠与同浓度的磷酸氢二钾以21：4混合 （二）、仪器： A、叶绿素铜钠合成 粉碎机，带温度计，搅拌器的烧瓶1个，回流冷凝管1支，恒温槽，100ml个烧瓶，冷凝管，1个抽滤瓶及漏斗，胶管若干，玻璃棒，100mL量筒1个，500ml圆底烧瓶，旋转蒸发器一台，台氏天平1台，试纸若干 B、叶绿素铜钠质量分析 751分光光度计1台，台式天平、分析天平各一台 四、实验步骤 （一）叶绿素铜钠的合成 1、蚕沙的浸泡及溶液的合成： 称取干燥蚕沙50g于500ml的烧杯中，加适量水润洗，加入150ml 80%的丙酮溶液使其完全浸没，置于30-40℃的恒温水浴中搅拌回流，3小时后取出并立即过滤，滤渣复浸一次。分离得墨绿色溶液转入500ml圆底烧瓶，于60-70℃水浴蒸出丙酮，当温度计读数骤然下降时，蒸发结束。回收的丙酮可循环用于下一批蚕沙的浸泡，将剩下的溶液从圆底烧杯移至布氏漏斗，抽滤浓缩、风干、称量。 2、皂化： 将浓缩液置于带搅拌子三口烧瓶中，用2%到5%NaOH水溶液调节使其p H等于11，用水浴加热在60℃下皂化回流0.5到1小时，收取下层。 3、萃取： 将皂化液冷却后转入分液漏斗加入等量石油醚萃取2-3次，除去杂质（黄色）静置分