分析_蛋白质测定.pptVIP

蛋白质的测定 凯氏定氮法：常用，法定的标准检验方法，适用于各类食品中蛋白质测定。 双缩脲法、酚试剂法：生化领域常用，食品分析尚未普遍应用。 折光仪、旋光仪：利用物理性质测定 染料结合法：急速发展中。 一、凯氏定氮法 又可分常量、微量、改良式凯氏定氮法，但原理是相同的，只是装置不同。 1、消化 2 NH2(CH2)2COOH + 13H2SO 4 → (NH4)2SO4 + 6CO2↑ + 12SO2 +16H2O 含氮有机物 + 浓硫酸→C + N + H2O C + 2H2SO4(浓) → CO2↑ + 2SO2 +2H2O 2NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 原理 为了加速消化,加入了k2SO4和CuSO4,它们的作用分别是 k2SO4: 提高溶液沸点 K2SO4 + H2SO4 = KHSO4 KHSO4 = K2SO4 + H2O ↑ + SO3 ↑ 随着反应的进行, H2O 和 SO3挥发,, K2SO4 浓度增大,溶液温度提高,加速有机物分解。但k2SO4不能太多，否则体系温度太高，引起生成的铵盐热分解而造成损失。 CuSO4 ：催化剂 C + 2CuSO4 = Cu2SO4 + CO2 ↑+ SO2↑ Cu2SO4 + 2H2SO4 = 2CuSO4 + SO2↑+ 2H2O 还可用TiO2 、HgO、 Se粉作催化剂，考虑效果、价格及环境因素，一般用CuSO4。还可加少量H2O2 、KClO等作为氧化剂加速有机物的氧化。 有机物全部消化后，溶液具有清澈的蓝绿色（ CuSO4的颜色）。 2、蒸馏 (NH4)2SO4 + 2 NaOH →2NH3 ↑+Na2SO4+H2O 3、吸收 2NH3 +4 H3BO3 (饱和）= （NH4）2B4O7 +5H2O 指示剂：0.2%甲基红（乙醇）：0.2%溴甲酚绿（95%乙醇）= 1：5 颜色变化：酒红色 →蓝绿色 4、滴定 （NH4）2B4O7 +5H2O +2HCl = 2NH4Cl + 4H3BO3 指示剂同上。终点变化：蓝绿色 → 酒红 关于3、4步反应的写法，说明 H3BO3 Ka = 5.8 ×10-10 H2B4O7 Ka1 = 1 ×10-4; Ka2 = 1 ×10-9 附：溴甲酚绿 pH3.8 ----5.4；黄→蓝 甲基红 pH4.4----6.2 红→黄 计算公式 蛋白质中N→1/2 (NH4)2SO4 → NH3 → NH4+ H2BO3- → H + (HCl) N% = c HCl × V HCl ×14 ×10-3 ×100% m 蛋白质% = N% ×K K = 1 / 纯蛋白质中的含氮量 = 1 / 16% = 6.25 K = 蛋白质的换算系数 m---- 样品质量，g K ------蛋白质的换算系数 鸡蛋、青豆、肉、玉米等 K= 6.25 大麦、燕麦、稞麦、小米、全小麦 K= 5.83 牛奶及其制品 K=6.38 硬果类 k= 5.30 动物胶 k = 5.55 大豆 k = 5.71 装置 p157 消化装置及常量式 P159 微量式 改良式凯氏定氮仪：体积小，效率高、简便、快速 洗涤整套仪器 （自来水洗，蒸馏水洗） 蒸馏瓶贮水（开B夹） 进样（开A夹） 蒸馏（开C夹） 停止蒸馏 洗涤 自动凯氏定氮法 1、主要装置 自动凯氏定氮仪：具有自动加碱蒸馏装置、 自动吸收和滴定装置及自动数字显示装置。 k2SO4、CuSO4 制成片剂 消化装置：由优质玻璃制成的凯氏消化瓶及红外线加热装置组合而成的消化炉。 2、实验步骤 消化：共八个消化炉。每个消化瓶装0.5-1g样品片剂两片，浓硫酸10毫升，用连接管连接密封消化瓶，开启抽气装置及电源，30分钟八个样品消化完毕，消化液完全澄清并呈绿色 自动凯氏定氮法 取出消化瓶，移于自动凯氏定氮仪中，连接开启加水电纽、加碱电纽、自动蒸馏滴定电纽，开启电源，约12分钟后，数显装置即可给出样品总氮百分含量。 开启排除废液电纽