DNA粗提取及鉴定.docVIP

PAGE PAGE 4 实验六 DNA粗提取及鉴定 一、实验目的与要求 理解DNA的粗提取和鉴定的原理，初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出的物质。 二、实验类型 本实验为综合型实验 三、实验原理及说明 1.DNA在氯化钠中溶解度是随着氯化钠的浓度的变化而变化。当氯化钠的物质的量的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理可以使溶解在氯化钠溶液中DNA析出。 2.DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质则可溶于酒精溶液； 3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 四、实验仪器 序号 仪器名称 台数 1 冰箱 1 2、 离心机 4 五、实验内容和步骤 1.实验准备： （1）用具 ：铁架台，酒精灯，石棉网，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（1000ml）,烧杯（100 ml、500 ml、50 ml、1000 ml各8个。试管20 ml8支），漏，试管夹，纱布。 （2）药品：95%酒精（实验前冷却24小时），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015 mol/L的氯化钠溶液饲料，二苯胺试剂 。 2.实验方法和步骤 （1）制备鸡血细胞：取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100ml，置于500 ml的烧杯中。将宰杀活鸡血（约180 ml，两只鸡）注入烧杯，搅拌，离心机离心2min（1000r/ min），使血细胞沉淀，吸出上清夜，得到血细胞。 （2）提取核物质：取5-10ml血细胞至50ml烧杯中，加20ml蒸馏水，搅拌5 min，过滤至1000ml烧杯中，取其滤液。 （3）溶解DNA：将2mol/L的氯化钠溶液40ml加到滤液中，搅拌1 min。 （4）析出DNA的粘稠物：向烧杯中加如蒸馏水，轻轻沿一个方向搅拌，当粘稠物不再增加时停止加水(约20 ml左右)。（这时氯化钠浓度相当于0.14mol/L）。 （5）滤取含DNA的粘稠物：用放有多层纱布的漏斗过滤上步的溶液至1000 ml的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上。 （6）DNA的粘稠物再溶解：向50 ml烧杯中注入2mol/L氯化钠 溶液20ml，将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，搅拌3 min。 （7）过滤含有DNA的氯化钠溶液：取100ml烧杯，两层纱布漏斗过滤上步溶液。 （8）提取含杂质的DNA：上述滤液中加入冷却的95%的酒精溶液50 ml，搅拌，用玻璃棒卷起丝状物放入20 ml试管。 （9）DNA鉴定：在20 ml试管中加入0.015 mol/L的氯化钠溶液2 ml，再加丝状物，取另一支试管作对照，各加2 ml二苯胺，将试管置于沸水中5 min，冷却后观察颜色。 六、实验数据处理与结果分析 鸡血细胞中红细胞含有细胞核，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，血液中的红细胞数目较多，可提供丰富的DNA 。血细胞加水后，充分搅拌使血细胞核充分破碎，释放DNA。单层纱布过滤后，NaCL溶液加到滤液中，充分晃动烧杯，使DNA充分溶于NaCL中。析出DNA的步骤中必须充分加水，才能稀释NaCL溶液，使DNA 溶解度变小，蛋白质溶解度增大，二者分离，同时用玻璃棒搅拌或离心，则可得到较粘稠的丝状物DNA。冷酒精沉淀DNA时，必须经过充分预冷，二者比例为1：2（DNA：95%酒精）。搅拌时沿一个方向，以便获得完整的DNA分子。实验中共有3次过滤，第1、3次要其滤液，使用纱布为1-2层，第2次要用其粘稠物，使用纱布多层。在含有最终提取的DNA丝状物的试管中，经过二苯胺颜色反应，试管溶液出现蓝色为DNA，对照试管溶液不变蓝色。 七、注意事项 制备鸡血细胞时防止鸡血凝固；析出DNA粘稠物时注意观察、轻轻沿一个方向搅拌，以确定加水的数量。 八、预习与思考题 预习：提取和鉴定DNA的原理。 思考题：提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清夜？ 附：植物细胞DNA的粗提取和鉴定 一、实验目的与要求 理解植物细胞DNA的粗提取和鉴定的原理，初步掌握植物细胞DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出的物质。 二、实验类型 本实验为综合型实验 三、实验原理及说明 植物细胞有细胞壁，细胞质膜与核膜，洗涤剂可以溶解细胞的细胞壁，去除脂质和蛋白质。 在溶液中，DNA链略带负电荷，盐离子可被吸附到DNA负电荷上，中和这些负电荷，只要控制盐的浓度，就能使DNA片段或者散开，或者聚集在一起。 DNA不溶于酒精，但细胞中的某些物质可溶于酒精，利用这一原理就可以用酒精萃取DAN。 DNA与二苯胺作用显蓝色。 四、实验材料及用具 洋葱、洗涤剂、NaCl、研钵、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒（10ml 1支）、滴管、试管（20ml 2支）、天平。 95%酒精、蒸馏水、0.0