探索细胞的奥秘-全式金.PDF

追追本溯源，探索细胞的奥索细胞的奥秘 —细胞生物学整体实验设计 北京全式金生物技术有限公司 细胞学实验基本流程 细胞培养细胞培养 血清血清、胰酶胰酶、双抗双抗、谷氨酰胺谷氨酰胺、PBSPBS等等 基因导入基因导入 TransIntroTransIntro ELEL 转染试剂转染试剂 基因表达 稳定表达筛选（G418）、慢病毒筛选 报告基因 亚细胞 蛋白相互 细胞整体 核酸水平 蛋白水平 检测 定位 作用 水平 萤光素酶 核酸提取 蛋白定量 免疫荧光/ CO-IP/GST- 细胞活性/ 检测 /WB/抗体 电镜 检测 抗体 镜 凋亡 /RT/qPCR 凋 / /q C Pulldown Pulldown 细胞培养 •组织培养 把体内的细胞把体内的细胞 、组织和器官放在类似体内的体外环境中组织和器官放在类似体内的体外环境中 ，可使其存活可使其存活、生长生长 、繁繁 殖或传代。 •细胞培养细胞培养((cellll cullture)) • 将机体内的组织取出分散（机械或酶消化）成为单个细胞，使其在人工培养条 件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制（contact inhibition）以及细 胞衰老过程等生命现象 在细胞培养中 细胞 再形成组织 胞衰老过程等生命现象。在细胞培养中 ，细胞不再形成组织。 • 传代（passage）或再培养（reculture），即把一瓶培养细胞全部或分成几 份接种份接种到到另另一些培养器皿中些培养器皿中。原代培养经首次传代成功后即为细胞系原代培养经首次传代成功后即为细胞系 （（cellll line）。 原代细胞制作原代细胞制作 • 取组织取组织 ，，放入平放入平皿中中。。用无用无Ca2+ 、、Mgg2+ 的的Hank’s液洗组织液洗组织2 ～3次次。。 • 剪碎胚体，用无Ca2+ 、Mg2+ 的Hank’s液振荡洗涤，静置片刻，待胚块 沉淀后吸去上清，重复3次。 • 加胰酶加胰酶 （（终浓度终浓度00.62625%% ）），置置337℃℃消化至胚块消化至胚块 ““起毛起毛”” （（大组织块边大组织块边 缘似纤毛运动）。 • 弃上清 ，加入含小牛血清的Hank’s液 ，用滴管反复吹打至见不到组织 弃 清 ，加入含小牛 清的 液 ，用滴管反复吹打 见不到 织 块。 • 用200 目细胞筛过滤至刻度尖底离心管中，离心10 min。 • 弃上清弃上清 ，加入少量生长液吹散细胞沉淀加入少量生长液吹散细胞沉淀 ，按细胞压积按细胞压积 （（11:300300 ））加生长加生长 液，分装入细胞培养瓶，置培养箱培养。 原代细胞原代细胞 鸡胚成纤维细胞