显微镜之构造原理及使用.PDFVIP

第4章 顯微鏡之構造、原理及使用 一、前言： 植物病害有許多是由微生物引起，而這些病原微生物通常無法以肉眼觀察 及描述形態，需要有工具協助觀察，認識顯微鏡的構造與操作，可將其應用在 植物病害病原菌型態之紀錄與描述，亦可協助進行許多病理研究工作（如免疫 螢光觀察）。 顯微鏡的基本功能是放大影像（magnification ）及解析影像（resolution ）， 光學顯微鏡可解析0.2 μm大小之物（以1000倍放大倍率而言），可清楚看見線 蟲內外部構造、真菌形態、及細菌的概略外形，而病毒顆粒則無法觀察（但可 看見病毒團粒 inclusion body ），需要用到電子顯微鏡。 二、參考文獻： 1. 國祥貿易：.tw 2. 清華大學貴重儀器中心：.tw 3. 彰化師大生物系：.tw 4. 美嘉儀器公司：.tw/company.htm 5. Tortora, G. J., Funke, B. R., and Case, C. L. 2001. Microbiology: An introduction. 7th Addison Wesley Longman, Inc. 887p. 三、顯微鏡的歷史： 顯微鏡（microscope ）由 micro 與 skopos延伸而來， micro 在拉丁文意 指微小 的意思，而 skopos 在希臘文意則指觀察的意思。各種形式的顯微鏡 均由一組鏡片所組成，且其主要差異在於所使用的光源種類、波長、鏡片系統 的特性與排列以及觀察影像所使用的方法。顯微鏡的發明已經沒有確切的年代 了，比較明確知道的是 17 世紀末業 van Leeuwenhoek 與 Hooke 兩位學者的 使用紀錄，當時 van Leeuwenhoek 所使用的顯微鏡只是單一鏡片組，而 Hooke 所使用的卻已是數片鏡片組成的複式顯微鏡。至此之後，顯微鏡即往複式顯微 鏡發展，經鏡頭的改良提高解像力 （resolution ）與對比（contrast ），比起 1683 年 van Leeuwenhoek 所使用的顯微鏡，其放大倍率已高出數千倍，而且成像 更清晰，功能也更強大。1880 年 Ernst Abbe 設計了第一顆油鏡頭；1904 年 Köhler 已經可以利用螢光顯微鏡（fluorescence microscopy ）觀察標本； 1934 年 Dutchman Zernike 發明了位相差顯微鏡（phase contrast microscope ）；1953 年 Nomarsky改良設計的DIC系統，使微分干涉差顯微鏡（differential interference contrast, DIC ）可以增加觀察標本的對比。1970年以後顯微鏡工業更是進步飛 快，除了鏡頭的更加精良之外，共軛顯微鏡（Confocal Microscopy ）與掃描式 原子探測顯微鏡（Scanning Probe Microscope, SPM ）的發明，使觀察標本的影 像，得以由原本二維空間變為立體的影像。 圖4-1. Hooke所利用之顯微鏡及所觀察到的物像繪圖。 四、顯微鏡的種類： 一般而言，用來觀察生物的顯微鏡依光源和透鏡系統的不同而區分，利用 一般光線經過透鏡聚焦後，使物體形成物像以便觀察者，有實體顯微鏡、及光 學顯微鏡；利用雷射光者有雷射掃描共軛焦顯微鏡；利用波長極短的電子束者 為電子顯微鏡，經電磁透鏡聚焦，使極小的物體成像，目前常用的有掃瞄式電 子顯微鏡和穿透式電子顯微鏡。 （一）實體顯微鏡（Stereomicroscopy ；解剖顯微鏡）：解剖顯微鏡主要是用來 觀察不透明的物體或生物標本外部形態，或在工業和部分生物醫學技術 上。此種顯微鏡受光源、景深和其他成像因子的影響，放大倍率在60倍以 下，解像效果較佳。 （二）光學顯微鏡(Light microscopy