精美细胞凋亡专题凋亡信号通路.ppt

细胞凋亡 李光超 2011-12-24 主要内容 细胞凋亡简介 Examples：细胞的程序性死亡（PCD)（发育学概念） Examples：细胞凋亡（形态学概念） Two Main Pathways 线粒体介导凋亡的大致过程 Bcl-2 family Release of cyt C and activation of casp-9 DISC （death-inducing signaling complex） TNF凋亡途径和存活途径 Part 4 细胞凋亡与疾病 THANK YOU!! 3. 内质网通路引起的凋亡（ER stress） * * 细胞凋亡概念及形态 细胞凋亡检测方法 细胞凋亡主要通路 细胞凋亡与疾病 细胞的程序性死亡programmed cell death （PCD) 2002年诺贝尔诺贝尔生理与医学奖 细胞凋亡是指为维持内环境稳定， 由基因控制的细胞自主的有序的死亡。 它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程 。 细胞凋亡（apoptosis） Part 1 细胞凋亡概念及形态 1.细胞的程序性死亡programmed cell death （PCD) 2.细胞凋亡（apoptosis） 脊椎动物的神经系统的发育： 蝌蚪尾的消失： 发育过程中手和足的成形过程： a 正常细胞 b 凋亡细胞(扫描电镜) c 凋亡细胞(透射电镜) Fig1.细胞坏死与凋亡的形态区别 Part 2 细胞凋亡的几种检测方法 形态学观察：普通光镜、荧光显微镜、透射电子显微镜 磷脂酰丝氨酸（PS）外翻分析（Annexin V/PI双染法） DNA ladder 线粒体膜电位的检测（JC-1染色） 细胞周期检测（Sub-G1） 半胱氨酸蛋白酶Caspase家族活性的检测（caspase-3） 形态学观察 普通光镜、透射电子显微镜、荧光显微镜 荧光显微镜结果（ Annexin V/PI ） 正常细胞 凋亡细胞 Fig2.流式细胞仪检测凋亡细胞 DNA ladder Annexin V/PI 双染法 诱导时间（h） 阴性 M Fig3.Cyt C诱导的凋亡细胞DNA电泳图 磷脂酰丝氨酸（PS）外翻分析（Annexin V/PI双染法） 正常细胞 positive JC-1一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。 JC-1有单体和多聚体两种存在状态 细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1染色) 6% 71% Fig2.流式细胞仪检测线粒体凋亡 凋亡细胞 Cleaved casp-3 细胞周期检测（Sub-G1） Caspase-3活化检测（WB） Sub-G1 Part 3 细胞凋亡主要通路 线粒体途径（ Instrinsic pathway） 死亡受体途径（ Extrinsic pathway ） 内质网通路（ER stress） 1.线粒体途径 （ Instrinsic pathway） 2.死亡受体途径 （ Extrinsic pathway ） tBid 1. 线粒体途径（ Mitochondrial pathway ） 线粒体不仅是细胞能量代谢的中心，而且在细胞内源性的死亡信号所诱导的细胞凋亡中处于中心位置。 细胞内部的死亡信号源自各种因素，如DNA损伤、氧化应激、X-射线、化疗药物、营养缺乏等。 因而，线粒体所介导的凋亡途径又称为细胞凋亡的内源途径。 损伤因素 线粒体跨膜电位（△ψ）的消失 线粒体渗透转运孔（PT pore）的开放 细胞色素C（cyt C）从线粒体中的释放 Caspase-9的激活 Caspase级联反应 细胞凋亡 Initiators Executioners Assistant Caspase family 含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（15种） 在哺乳动物细胞中，调节线粒体外膜通透性。 大多数定位在线粒体外膜上，或受到信号刺激后转移到线粒体外膜上。 Pro-apoptotic Anti-apoptotic Bcl-2 family BH4 BH3 domain : a critical death domain “BH3-domain-only” members are all pro-apoptotic. BH1-4: BCL-2 homology regions TM : carboxy-terminal hydrophobic domain. /content/15/22/2922.full 线粒体PT孔： 主要位于内膜的腺苷转位因子（Adenine nucleotide translocato