讲座薄层色谱讲座薄层色谱法的基本技术.PDFVIP

讲 座 薄 层 色 谱 讲 座 第一讲 薄层色谱法的基本技术 何 丽 一 （中国医学科学院药物研究所，北京） 薄层色谱法(Thin-Layer Chromatography, 薄层色谱法虽已有卅多年历史，操作、设备等 简称TLC）是Kirchner等人在五十年代从经典柱色 有很多改进，但至今整个操作过程仍是不连续的， 谱法及纸色谱法的基础上发展起来的一种色谱技 其步骤如下： 术。六十年代后，Stahl等人对薄层色谱法的标准 化、规格化及扩大应用等方面进行了许多工作，使 该法日趋成熟。薄层色谱法具有设备简单、操作方 便、分离快速、灵敏度及分辨率高、显色剂选择性 大，以及制备薄层载量较纸色谱大，而切割色带较 柱色谱方便等优点。因此，在分离分析及小量制备 工作中基本取代了纸色谱法及经典柱色谱法。 薄层色谱法在仪器自动化程度、分辨率及重现 性等方面不如后来发展起来的气相色谱法和高效液 相色谱法，被认为只是一种定性和半定量的方法而 未受到足够的重视。但是薄层色谱法有如下特点： 固定相使用一次弃去，样品的预处理比较简单；对被 分离物质的性质没有限制，使用范围较广；平面薄层 1-1吸附剂或载体的选择及薄层的制备 具有多路柱效应，可同时进行多个样品的分离；在 （1 吸附剂或载体的选择：除了颗粒较细、 同一色谱上可根据被分离化合物的性能选择不同显 粒度范围较窄外，柱色谱用的吸附剂或载体薄层色 色剂或检测方法进行定性或定量，并且可以重复测 谱都能用。但要使一组混合物得到很好分离必须要 定。正由于薄层色谱有不少优点，因此在实际工作 根据被分离化合物的性质来选择合适的固定相。分 中仍是被广泛应用的一种方法。 离亲脂性化合物常选择氧化铝、硅胶、乙酰化纤维 薄层色谱法是开放型的色谱法。将要分离的混 素以及聚酰胺；分离亲水性化合物常选择纤维素、离 合物点在用固定相均匀涂布的薄层上，用合适的展 子交换纤维素、硅藻土及聚酰胺等；但也有例外， 开剂在密闭的层析槽中展开，被分离的成份不随展 如脂溶性叶绿素在氧化铝和纤维素上都能分离。常 开剂流出而选择性地保留在原点和溶剂前沿之间， 用的吸附剂或载体有： 被分离化合物在薄层上的位置用Rf值（原点至样 硅胶 硅胶表面带硅醇基，呈弱酸性(pH= 品斑点中心的距离／原点至溶剂前沿的距离）来表 4.5)，活性硅胶适合分离酸性或中性化合物，如酚 示，当Rf值为0时，即样品留在原点，在薄层上 类、醛类、生物碱类、尢体化合物以及氨基酸类， 没被展开，R值为1时，样品不被保留，随溶剂 是基于吸附作用；非活性硅胶含有一定的水，在分 展开至前沿；合适的Rf值应在0.20.8之间。按 离色素时是基于分配作用。 薄层色谱使用的固定相的性质及其分离机制可分 氧化铝 有弱碱性（pH=9、酸性（pH=4及 为吸附薄层、分配薄层、离子交换薄层及分子排阻 中性（pH=7.5三种氧化铝。弱碱性氧化铝用来分离 薄层等。 中性或碱性化合物，如多环碳氢化合物类、生物碱 类、胺类、脂溶性维生素及醛酮类；中性氧化铝适 涂布器。涂布后的薄层应水平放置，室温凉干备 用于酸性及对碱不稳定的化合物的分离；酸性化合 用。如需活化，则干燥温度及时间可根据活度要求 物可用酸性氧化铝分离。 变化。这样制得的薄层厚度约为0.2-0.3mm，适 硅藻土 本身不具吸附性，以一定量加入硅胶 合定性或定量时使用。制备薄层的厚度要求约0.5 等吸附剂中可以降低吸附力。适合于某些化合物的 -2mm。 分离，更常用来作为分配色