大肠杆菌的培养和分离精品.pptVIP

6、培养 为什么要倒置培养？ 恒温37℃培养 * 单菌落 * 菌种的保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 * 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 * 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 * 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 * 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 * 平板划线时不能划破培养基的原因? ①一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； ②二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 * (2)碳源 可作为碳源的物质有: 含碳无机物: 、 、 含碳有机物： 蛋白质 脂肪酸 ②不同微生物所利用的碳源不同 异养型微生物的碳源为 自养型微生物的碳源为 碳酸盐 碳酸氢盐 二氧化碳 糖类（主要） 含碳有机物（有机碳） 含碳无机物（无机碳） * (3)氮源 可作为氮源的物质有: 含氮无机物： 、 、 、 含氮有机物： 蛋白胨 牛肉膏 尿素 ②固氮微生物所利用的氮源是 氮气 氨气 硝酸盐 氨盐 氮气 * 培养基内所需的其他条件 (1)pH值 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱性 (2)特殊营养物质---- ? 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生素 (3)氧气的含量 如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件 (4)渗透压 生长因子 * (三)无菌技术 1、获得纯净培养物的关键: 2、无菌技术 的四个方面(参看教材20页) 防止外来杂菌的入侵 * 无菌技术的四个方面 （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 * * 3、消毒与灭菌 (1)消毒： 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢和孢子吗？ 方法: 煮沸消毒法 巴氏消毒法 :如牛奶的消毒 化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 紫外线消毒 (不包括芽孢和孢子) * （2）灭菌 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧 注意适用范围 * 配制培养基 包器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种、划线 培养 观察记录 实验流程 * 实验流程 配制培养基 包器材 灭菌 菌种扩增 倒平板 接种、划线 培养 观察记录 * 1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以