细胞工程与作物育种教学课件.pptVIP

第二节 体细胞无性系变异与作物改良 一、 基本概念 　 植物体细胞在离体条件下，以及在离体培养之前，会发生各种遗传和不遗传的变异。 无性系变异（somaclonal variation）：将遗传上的变异称为无性系变异； 变异体（variant）：不加任何选择压力而筛选出的变异个体； 突变体（mutant）：经过施加某种选择压力所筛选出的无性系变异。 二：体细胞变异的遗传基础 （一）细胞遗传学基础 1.外植体细胞先存在的变异 2.染色体数量变异 3.染色体结构变异，断裂和重组，相互易位，缺失等。 （二）细胞分裂机制与遗传变异 1.细胞脱分化后的细胞异常分裂 2.无丝分裂 （三）分子遗传学基础 1.基因突变 2.DNA碱基修饰 3.基因重排 4.DNA总量的变化 5.转座因子的激活 Comparison of the transgenic plants by particle bombardment with pollen-tube pathway 三: 体细胞无性系变异的广泛性和多样性 四: 体细胞无性系变异的分子检测 （一）酶谱分析检测变异 （二）RFLP检测变异 （三）RAPD检测变异 （四）其他分子检测 五：细胞和组织培养与作物育种 （一）抗性 抗病 抗除草剂 抗寒 耐盐 耐旱 Streptomycin resistance   resistant to Liberty herbicide susceptible to Liberty herbicide （二）、雄性不育突变体利用体细胞变异产生雄性不育系证明是一条可行的途径。 （三）、各种形态特征(株高)和生物学特性(生育期)突变体体细胞变异在形态特征和生物特征都有广泛的变异。 优良品种 细胞培养 R0 R1群体 改良的体 细胞克隆 遗传稳定性测试 育成新品系 区域试验 审定 投入生产 田间试验 多点田间试验 继续田间试验,种子富集 互交测试 确定遗传方式 利 用 体 细 胞 克 隆 变 异 育 种 的 技 术 路 线 体细胞无性系变异的不足： 1.产生的变异多，变异类型复杂 2.变异的方向难以控制，难以预测 3.筛选出的突变性状有丧失抗性的趋势 4.多次继代后分化能力丧失 5.无性系变异更适合营养繁殖作物 第三节 原生质体培养和 体细胞杂交 原生质体：指用特殊方法脱去细胞壁的、裸露的、有生活力的原生质团。就单个细胞而言，除了没有细胞壁外，它具有活细胞的一切特征。 一.原生质体培养的利用途径 ① 通过原生质体培养可以制造单细胞无性系。 ② 原生质体可以作为基因转化的受体，使之接受外源遗传物质（如细胞器、染色体或DNA片段等）产生新的变异类型。 ③ 利用原生质体进行许多基础性研究，如细胞生理、基因调控、分化和发育等。 ④ 细胞融合即体细胞杂交。 　体细胞杂交（somatic hybridizatioin）又称原生质融合（protoplast fussion），是指两种原生质体间的杂交。 胞质杂种（cytohybrid）：是指体细胞杂交过程中有意识地去除（或杀死）某一亲本的细胞核，得到的将是一个亲本细胞核和两个亲本细胞质的杂种细胞。 二 植物体细胞杂交（原生质体融合） 体细胞杂交的特点 　　最大特点是：有可能使有性杂交不亲和的双亲之间杂交成功，也就是说在体细胞水平上的杂交，其双亲间的亲和性或相容性似乎有所提高，因而有可能扩大杂交亲本和植物资源的利用范围。 体细胞杂交的环节 ① 原生质体的分离和培养； ② 原生质体间的融合； ③ 融合后杂种细胞的选择； ④ 诱导杂种细胞产生愈伤组织和再生植株。 Isolation of rice protoplasts from green tissue 原生质体杂交的过程 诱导分化 1） 选择合适的实验材料 2） 酶的类型和处理条件： 果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶等 1、 原生质体的分离与培养 3）原生质体计数 第九部分 细胞工程与作物育种 基本概念 作物细胞工程（plant cell engineering) 是以细胞和组织培养技术为基础发展起来的一门学科。它以细胞为基本单位，在体外（in vitro）条件下进行培养、繁殖或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿产生某种物质的过程。 植物细胞细胞工程 动物细胞工程 理论基础： 细胞的全能性（cell totipotency）。因为细胞核内有保持物种遗传性所需要的全套遗传物质所以高度分化的体细胞具有发育成一个生物体的能力。 植物组织