[理学]化学分离富集课件5第五章色谱法1.ppt

1906年由俄国植物学家Tsweet创立植物色素分离。 Tiselius, A.W.K. Martin, A.J.P. Synge, R.L.M. 1948年 Nobel 化学奖 1952年 Nobel 化学奖 吸附色谱与电泳 分配色谱 色谱法起过关键作用的诺贝尔奖研究工作 二、色谱法的特点 优点： 高选择性---可将性质相似的组分分开 高效能---反复多次利用组分性质的差异产生很好的分离效果 高灵敏度---10-11－10-13g，适于痕量分析 分析速度快---几－几十分钟完成一次分离，可测多种样品 应用范围广---气体，液体、固体物质分离分析 缺点： 对未知物分析的定性专属性差 需要与其他分析方法联用(GC-MS,LC-MS) 从色谱流出曲线中，可得许多重要信息： (1) 根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最 少个数； (2) 根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析； (3) 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析； (4) 色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离 效能的依据； (5) 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相） 选择是否合适的依据。 贡献 用热力学的观点阐明了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程； 解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置； 提出了计算和评价柱效的参数。 在填充色谱柱中，当组分随流动相向柱出口迁移时，流动相由于受到固定相颗粒障碍，不断改变流动方向，使组分分子在前进中形成紊乱的类似涡流的流动，故称涡流扩散。 气相色谱速率板高方程 4.载气流速与柱效——最佳流速 不同分离度时色谱峰分离的程度 1. 分离度与柱效的关系 2. 分离度与选择因子的关系 当 ? = 1时，R = 0，这时，无论怎样提高柱效也无法使两组分分离。显然， ? 大，选择性好。研究证明 ? 的微小变化，就能引起分离度的显著变化。如达到相同分离度，当?＝1.01时，所需时间是?＝1.1时的84倍。 一般通过改变固定相和流动相的性质或降低柱温，可有效增大 ? 值。 α、k’ 及 N 如何控制分离度 七、色谱法的定性定量方法 （一）定性分析 1．利用保留值定性：已知对照物定性 该法是基于在一定操作条件下，各组分保留时间是一定值的原理 (1)分别以试样和标准物进样分析——各自的色谱图 (2)对照：如果试样中某峰的保留时间和标样中某峰重合，则可初步确定试样中含有该物质 (3)也可通过在样品中加入标准物，看试样中哪个峰增加来确定 2 相对保留值定性 (1) 分别以试样和标准物进样分析——各自的色谱图 (2) 对照：在样品和标准中分别加入同一种基准物s，将样品的ris和标准物的ris相比较来确定样品中是否含有i组分 保留值定性要求两次进样条件完全一致，这是比较困难的；而用相对保留值定性， 则只要温度一定即可 。 3 利用保留指数定性（科瓦茨指数）I 保留指数是把物质的保留行为用两个紧靠它的标准物（一般是两个正构烷烃）来标定，设正构烷烃的保留指数为碳数×100；测定时，将碳数为n和n+1的正构烷烃加入到样品x中进行色谱分析，此时测得这三个物质的调整保留值分别为：tR(i)，tR(n)和tR(n+1)，且待测物x的调整保留值介于两个烷烃之间 4 利用化学反应定性：收集柱后组分，官能团反应定性鉴别（非在线） 5 利用两谱联用定性：GC-MS，GC-FTIR 定量分析的任务是求出混合样品中各组分的百分含量；色谱定量的依据是，当操作条件一致时，被测组分的质量（或浓 度）与检测器给出的响应信号成正比，即： ?i = fi ? Ai 式中?i为被测组分i的质量； Ai为被测组分i的峰面积； fi为被测组分i的校正因子 可见，进行色谱定量分析时需要： （1）准确测量检测器的响应信号— 峰面积或峰高； （2）准确求得比例常数 — 校正因子； （3）正确选择合适的定量计算方法，将测得的峰面积或峰高换算为组分的百分含量 1. 峰面积的测量 2. 定量校正因子 （三）定量方法 1．归一化法 2．外标法 3．内标法 1. 归一化法 定义：所有出峰组分含量之和按100%计定量方法 依据：组分含量与峰面积成正比 2.外标法 外标法实际上就是常用的标准曲线法