SPRi实时检测淋巴细胞和抗体芯片的相互作用-Horiba.PDFVIP

SPRi实时检测淋巴细胞和抗体芯片的相互作用 1 2 1 1 Emmanuel SURANITI , Elodie SOLLIER , Roberto CALEMCZUK , Thierry LIVACHE , 2 2 1 Patrice MARCHE , Marie-Bernadette VILLIERS , Yoann ROUPIOZ 1 CREAB,UMR 5819 (CEA-CNRS-UJF), DRFMC, CEA Grenoble France. 2 INSERM U823,equipe 8, Institut Albert Bonniot La Tronche France 将生物芯片应用于细胞分析已吸引了众多研究者开发用于诊断和研究的新工具，而微阵 列技术则在检测相互作用方面起着极其重要的作用。SPRi （表面等离子体共振成像）光学 检测方法则结合了前面两种技术，在实时、直接检测无标记细胞和表面相互作用领域备受关 注，本文介绍的是通过SPRi 技术探测B 或T 淋巴细胞在抗体阵列上的位点特异性结合。 原理 抗体通过吡咯修饰用电聚合方法固定在SPRi Biochip TM 生物芯片上。将所选鼠细胞系 样品注入，即可通过直接、无标记的SPRi 技术监测细胞与抗体的相互作用。 材料和方法 1）制备吡咯-抗体结合物并将其固定在生物芯片上 先将一片疏水性膜覆盖在生物芯片的金表面，未遮盖的区域用于电沉积生物分子。然后 将 3 个吡咯修饰的抗体用电聚合方法固定到生物芯片未遮盖区域的金薄膜上。分析采用 CD19 和CD3 单克隆抗体作为淋巴细胞膜蛋白靶标，人体IgG 作为阴性对照抗体。每个样 品在芯片上的点样数都大于1。 2 ） SPRi 实验 点样之后，将SPRi BiochipTM 生物芯片置于SPR 成像平台上，用DMEM 作为缓冲液。 3 ）注入溶液 将来源于鼠细胞系的LS102.9 B-型淋巴细胞团和13G7 T-型淋巴细胞团重新分散到含 5%FCS 的DMEM 缓冲液中。在注射之前，先用纯DMEM 将细胞样品稀释到特定浓度，然 后将0.3-1mL 的样品注入流通池中。 对于细胞特异性结合，LS102.9 细胞会与 anti-CD19 位点反应，而 13G7 细胞会与 anti-CD3 位点反应。 图1 纯淋巴细胞在生物芯片上的细胞特异性结合 (a) 表面修饰有3 种不同抗体的SPR 图像（每种抗体都占2 个位点）；anti-CD19，anti-CD3 和对淋巴细 胞没有特异性亲和力的人体IgG 阴性对照。 (b) 在第一个细胞样品注入50min 之后采集到的SPRi 图像（LS102.9 淋巴细胞，300mL，104 细胞/mL ）。 (c) 在第二个细胞样品注入50min 之后采集到的SPRi 图像（13G7 淋巴细胞，300mL，104 细胞/mL ）。 (d) 在第三个细胞样品注入50min 之后采集到的SPRi 图像（LS102.9 淋巴细胞，300mL，3X104 细胞/mL ）。 结果与讨论 SPRi 检测细胞与抗体芯片的结合 首先将浓度为 104 细胞/mL 的 LS102.9 淋巴细胞注射到系统中，从SPR 图像上可以 看到分别有4 个和5 个细胞停留在anti-CD19 位点上。然后注入浓度为104细胞/mL 的 13G7 细胞样品，则分别有5 个和7 个细胞停留在anti-CD3 位点上。此时在对照anti-CD19 位点 上没有发现细胞，但是在对照 IgG 位点上则有细胞结合上去。接着注入较高细胞浓度的 LS102.9 样品，结果显示细胞不仅在相应的anti-CD19 上停留，而且也在 IgG 和anti-CD3 位点上有结合。这是由于后续注入的细胞在时间上非常接近于第一次注入，所以增强的结合 相应来自于前一次的注入。 当注射高浓度混合淋巴细胞时，anti-CD3 和anti-CD9 区域的反射率变化增加，而对照 IgG 位点的反射率却没有显著增加。 图2 SPR