东亚三角涡虫肌球蛋白轻链MLC融合蛋白原核表达载体的构建及其.PDFVIP

第３３卷 第１期 世界科技研究与发展 Ｖｏｌ．３３ Ｎｏ．１ 　 　 ２０１１年２月 ３３－３５页 ＷＯＲＬＤＳＣＩＴＥＣＨＲ＆Ｄ Ｆｅｂ．２０１１ ｐｐ．３３－３５ 东亚三角涡虫肌球蛋白轻链（ＭＬＣ）融合蛋白原核表达载体的构建 及其在大肠杆菌中的表达 余淑英　赵博生 （山东理工大学生命科学学院，淄博２５５０４９） 摘　要：构建了涡虫肌球蛋白轻链融合蛋白原核表达载体，并进行表达，根据涡虫基因文库中肌球蛋白轻链（Ｍｌｃ）基因完整的ＯＲＦ 序列设计合成特异性引物，通过ＰＣＲ扩增涡虫Ｍｌｃ基因，并插入到融合蛋白原核表达载体ＰＥＴ－２８ａ中 ，转化宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３） 细胞，０．４ｍＭｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ诱导表达ＭＬＣ蛋白．重组质粒测序和酶切结果显示Ｍｌｃ基因已正确插入ＰＥＴ２８ａ中，重组蛋白经ＳＤＳ ＰＡＧＥ在１８．２ＫＤ处有一条明显的蛋白表达条带。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测得到同样大小的条带。结果表明，涡虫ＨｉｓＭＬＣ融合蛋白已成 功表达。 关键词：东亚三角涡虫；肌球蛋白轻链；原核表达；蛋白质印迹法 中图分类号：Ｑ７８５　　　文献标识码：Ａ　　　 ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒｏｆＰｌａｎａｒｉａｎＭｙｏｓｉｎＬｉｇｈｔＣｈａｉｎａｎｄ ＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣｏｌｉ ＹＵＳｈｕｙｉｎｇ　ＺＨＡＯＢｏｓｈｅｎｇ （Ｓｃｈｏｏｌｏｆｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｉｂｏ２５５０４９） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆｐｌａｎａｒｉａｎｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ（Ｍｌｃ）ｉｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．ＴｈｅｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｉｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥｓｃｈｅ ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ．ＰｌａｎａｒｉａｎＭｌｃｃＤＮＡｉｓａｍｐｌｉｆｉｃａｔｅｄｂｙＲＴＰＣＲｗｈｉｃｈｕｓｅｓｃＤＮＡｆｒｏｍｔｈｅｐｌａｎａｒｉａｎｇｅｎｅｂａｎｋａｎｄｓｐｅｃｉａｌｐｒｉｍｅｒｓｄｅｓｉｇｎｅｄａｃ ｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｋｎｏｗｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＭｌｃＯＲＦ．ＩｔｓｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄＰＥＴ２８ａｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｏａｓｔｒａｉｎ ｏｆＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）．ＴｈｅｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＩＰＴＧ０４ｍＭｏｌ／Ｌ．ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｆｒｏｍｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎｄｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎｓｈｏｗｔｈａｔＭｌｃｇｅｎｅｈａｄｂｅｅｎｃｏｒｒｅｃｔｌｙｉｎｓｅｒｔｅｄＰＥＴ２８ａ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｉｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ ａｆｆｉｎｉｔｙｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｔｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｗａｓｅｓｔｉｍａｔｅｄｔｏｂｅａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ１８２ＫＤｂｙＳＤＳＰＡＧＥ．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｓｗｉｔｈＨｉｓａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｈｏｗｅｄｓｉｍｉｌａｒｒｅｓｕｌｔ．ＩｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＨｉｓＭＬＣｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｏｆｐｌａｎａｒｉａｎｉｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｄｕｇｅｓｉａｊａｐｏｎｉｃａｐｌａｎａ