博士(兽医学)杉本真由美学位论文题名GenmicanaーySisf.PDFVIP

博 士 （獣 医学 ）杉 本 真 由美 学位論文題名 Genomic analysis of hereditary myopathy of diaphragmaticmuscles inHolstein-Friesiancattle （ホルスタイン種牛における遺伝性横隔膜筋症のゲノム解析） 学位論文内容の要旨 ホルスタイン種牛における遺伝性横隔膜筋症(Hereditarymyopathyof diaphragmatlcmuscles；HMDM）は4～7歳に発症し、鼓張症および呼吸器不全を 主徴とする常染色体性劣性遺伝病であり、横隔膜筋における筋変性及びコア様 構造が病理学的特徴である。ヒトにおける多くの遺伝性筋症のうち、このコア 様構造を伴う疾患としてはdesmm－relatedmyopauly（DRM）が知られている。 DRMは心筋および骨格筋に存在するコアにdesminが蓄積する常染色体性優性 遺伝病であり、desmin遺伝子の変異やdesminの折り畳み構造を整える働きを 持つchapemneである甜phaIB－cづs伽lin遺伝子の変異によって発症する。HMDM の原因遺伝子の同定は、横隔膜筋におけるコ．ア様構造の出現と筋線維の変性に 関する分子的ヌカニズムの解明に手がかりを与える。 HMDMの原因遺伝子を同定するために、12頭の発症牛を含む26頭の家系に ついて1200個のマイク口サテライ トマーカーを用いて連鎖解析を行った。そ の結果、第23番染色体にあるHea．t―shockprotein70（Hsp70）遺伝子の1っが欠 損することによりHMDMを発症することが判明した。Hsp70は熱などのス ト レスを与えると発現が増える70kdの蛋白であり、主要なchaperoneのーつであ る。その遺伝子は第23番染色体のMHC領域にあり、9kbの非翻訳領域をはさ むH9PAJAとH嫐JBの2つの遺伝子からなる。LongRIangePCRにより、12頭 の発症牛はすべて9kbの非翻訳領域及びH‘舛）AJBが欠損しており、DNAの解 析においては、鼠ゞ以JBの欠損によってHMDMを発症することが示唆された。 次に、mRNAおよび蛋 白の発現においてHMDM発症牛 と正常牛のHsp70が どのように異なるか調べた。RT－PCRにより、発症牛において欠損していない Hsp70遺伝子H‘舛）AJAのmRNAは正常に発現していることが確認された。しか し、Wbtemblottingおよび免疫染色により、発症牛においてはHsルO蛋白質量 が正常牛と比較して著しく減少していることが明らかになった。また、免疫沈 降により正常牛の横隔膜筋ではグリコーゲンリン酸化酵素等の酵素がHsp70蛋 白と結合していることが示唆された。さらに、免疫染色により発症牛のコア様 構造にグリコーゲンリン酸化酵素が蓄積していることが判明した。以上のこと からHMDM発症牛の横隔膜筋ではHsp70蛋白が発現 していないため、Hsp70 により折り畳み構造が整えられて正常に機能すべき酵素が凝集することによっ て、コア様構造の出現が起こり、ひいては筋変性が引き起こされることが明ら かとなった。 学位論文審査の要旨 主 査 教 授 高 島 郁 夫 副 査 教 授 高 橋 芳 幸 副 査 教 授 稲 教 葉 睦 副 査 助 授 苅 和 宏 明 学位論文題名 Genomicanalysisofhereditarymyopathyof ． diaphragmaticmusclesinHolstein-Friesiancattle （ホルスタイン種牛における遺伝性横隔膜筋症のゲノム解析） ホルスタイン種牛における遺伝性横隔膜筋症(Hereditarymyopathyof diaphragmaticmuscles;HMDM)は4■--7歳に発症し、鼓張症およぴ呼吸器不 全を主徴とす