手工仪器和自动仪器鉴定肠杆菌科和其它革兰阴性需氧菌.doc

手工仪器和自动仪器鉴定肠杆菌科和其它革兰阴性需氧菌 说明 准确的鉴定肠杆菌科细菌和其它发酵葡萄糖和非发酵葡萄糖的细菌是近年来上百种刊物的一直讨论的课题。随着每一个新的或是改进的商业化产品或系统的出现，又会引来这样的疑问“这个新的更好一些吗？”又会引起那些想在决策过程中作些贡献的科学家的一系列的评论。 最近提得最多的是鉴定可能是具有潜在生物威胁的细菌。炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌和土拉热弗朗西丝菌分类到具有潜在生物威胁的细菌。这类生物的鉴定是最紧要的。然而能够对这些细菌进行精确鉴定的商业化产品还相对较少。通常实验室只把它们作为未知菌株处理，不作进一步的研究无法确认。 本篇综述容纳了大量的商品化产品即当前能有效鉴定肠杆菌科和氧化葡萄糖及非氧化葡萄糖的革兰阴性菌手工和自动鉴定仪。并介绍了在过去三十年细菌鉴定的发展情况，以及各种产品的组成成分、包装贮存温度、细菌悬液的制备和细菌培养的培育、所需试剂和附带试验及质控。对当前计算机中所包含的信息和相关文献引文进行了评论，每段都介绍了相应的网站及其附带信息。 历史回顾 早在二十世纪之前，人们就发现用生化反应可以把革兰阴性菌分为两个主要的科肠杆菌科和非发酵菌。这两群细菌通常引起人类细菌感染 ，偶尔也会导致流行病的爆发。 在1898年，Voges和Proskauer发现加入KOH的一些细菌悬液可以与伊红作用产生红色。1911年，Rusell观察到双糖培养基可以分离到伤寒、副伤寒和痢疾杆菌。Koser首先发现细菌对枸橼酸盐的利用与否可以把其分为不同的属种，但Simmons比Koser更进一步，他把琼脂和麝香草酚兰加入到培养基中使其显色。Levine等报道通过使用不含有醋酸铅的培养基可以发现硫化氢的生成。比Kligler有新的突破。1946年，Christense介绍了一种培养基可以检测出尿素酶的产生。1955年，Moller描述当细菌分解一些氨基酸，即：赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、谷氨酸是改变了培养基内的ph值，是溴甲酚紫指示剂变色。 然而在运用生化实验时细菌进行属种的鉴定时，需要解决的问题是如何缩短鉴定所需的时间，并且能得出正确的鉴定结果。1948年，Arnold和Waever描述了一种检测吲哚生成实验的微量技术，将细菌接种于1ml量的培养基中，仅相当于6滴的大小，2h得出结果。1949年，Soto描述了一种将糖类与溴甲酚紫混合于纸盘上的检测—细菌对糖类的利用实验。这样有效的减少了试管培养基的使用数量。试管培养基是需要将接种好细菌的试管培养基放在近旁，在8h内获得实验结果。1962年，Leminor和Hamida宣布β-半乳糖苷酶实验，仅在孵育1h后就可得到可靠的结果。到1963年，Vracko和Sherris将纸盘实验改为斑点实验应用于吲哚生成实验，在于用kouacs’管实验的对比中，他们获得了令人惊喜的相关性。 1964年，Warnerchilcott实验室的普通诊断部门介绍浸入pathotec试剂的纸片可以用来检测临床症状显著的细菌，是否能产生一些特殊的酶。如赖氨酸脱羧酶，鸟氨酸脱羧酶，七叶苷，尿素酶和吲哚以及苯丙氨酸脱氨基酶。这项技术的成功改变了以试管基础的技术时代，为多种手工、自动的细菌鉴定仪器的制造（提供技术基础）打开了大门。 所有的商业鉴定系统都是5种不同技术中的一种或是一种综合理论为基础的，包括需要孵育15-24hPH基础实验，需要2-4h的酶基础实验、碳利用实验、视觉检测细菌生长、或是由色谱仪检测易挥发或不挥发的脂肪酸。 Ph基础实验的阳性反应是通过一种或多种染料颜色的改变表现的。细菌利用糖时，ph呈酸性；蛋白被分解时，会产生含氮化合物，ph呈碱性。这些反应是由细菌的种类、孵育时间和温度决定的。 1980年Bascomb和Spencer介绍了几种快速的鉴定仪，是通过检测细菌悬液中酶的活性得出鉴定的，一般需要6h。酶基础实验的颜色变化是因细菌中含有特定的酶，能水解一种无色化合物，释放色原体或荧光素导致的。因为酶活度测定所需的时间比ph基础实验所需的时间短。机会污染就不是临界因素？ 第三种反应的类型是碳源利用，当细菌在含有四唑紫染料的环境中利用碳时它的代谢产物与四唑紫染料之间会引起电子的转移，在氯化过程中细菌的呼吸作用不断增强，这种电子转移就可以通过对染液的比色中测得。这个反应最短可在4h发生。 第四种方法是直接观察细菌的生长状况，待检菌生长时浓度升高，结果判断可以直接与质控（与待检菌同时接种）相比较亦可利用Wikerham卡片读浊度。这种方法一般读数困难并且至少孵育整夜。 最后一种方法太复杂并不常用它需要检测细胞脂肪酸代谢的中产物。中产物在色谱描会议上所显示的图形被当作已知的信息库模式。 表1 64年来肠杆菌科细菌分类群的增加 年 参 考 文 献 个 数 属 种 193