曲霉属.doc

曲霉属 1.检验目的：从病损中分离曲霉属霉菌。 2.标本来源：皮屑、甲屑、耵聍、粪、尿、活检与尸检标本、脓血、痰、窦道排泄物及气管冲洗液等。 3标本收集和制备： 皮屑：⑴检查前一周，皮损部位不应使用抗真菌药物。取材前局部用70%酒精彻底消毒，不能使用酒精的部位可用无菌蒸馏水清洗数次。 ⑵接种刀火焰消毒冷却后，轻轻刮取皮屑，滴一滴5%~10%KOH直接检查。 甲屑：病甲局部用70%酒精消毒，刮取正常甲与病甲交界处并且贴近甲床部的甲屑。 脓液：取标本时损害周围应先用70%酒精消毒，对溃破的皮损可刮取脓液，若窦道和瘘道则应刮取窦道和瘘道壁，尽量从较深部位获取标本，应包括部分管壁周围组织，未溃破的脓肿最好使用无菌注射器穿刺抽吸。 血液：无菌抽取4ml血液置于无菌抗凝管中，立刻送检。 体液：⑴体液包括无菌抽吸的支气管积液、关节腔积液、心包积液、腹水、胸腔积液、胸膜积液、滑膜液等。标本量为10ml。 ⑵离心，2500r/min,10min，然后用无菌移液管移去上清液，留约2ml沉淀液。 ⑶离心沉淀液做KOH涂片直接检查或按需要进行染色检查。 痰液：标本取晨痰，起床后刷牙，并用无菌蒸馏水漱口数次，包括仰头深刷喉咙，也可在饭后3~4h刷牙漱口后取痰。取痰时应用力咳嗽，咳出肺部深处痰，吐入广口有盖的无菌玻璃瓶中，盖紧，吐痰时尽量不要有唾液，痰量宜3~5ml，立即送检。 尿液：⑴标本应取晨尿。 ⑵男性取标本前应先彻底清洗双手，并用肥皂清洗龟头盒包皮数次，再用无菌蒸馏水冲洗数次。开始排尿应接中断尿，完后立即送检。 ⑶女性则先清洗双手，用肥皂、纱布垫清洗外阴数次，应自前向后，再用无菌整流说冲洗数次，然后开始排尿，当排尿至一半是，另一手持广口无菌玻璃瓶收集尿液。 ⑷尿液标本应立即受检，先离心，2500r/min,10min。然后用无菌吸管移去上清液，余液接种于沙氏琼脂培养基。37度培养4周 粪便：标本应尽量挑去有脓、血或粘液的粪便，还应尽量避免尿液的污染。标本应置于无菌有盖的纸盒中或其他广口无菌密闭容器中，立即送检。 骨髓：按骨髓取材常规，用无菌含抗凝剂的注射器抽取0.5~1ml骨髓，接种于沙氏培养基置37度培养4周。 眼部标本：角膜溃疡取材应在活体组织显微镜下进行。局部麻随后从溃疡底部和边缘刮取足量的标本，直接接终于沙氏琼脂斜面。 组织：组织标本包括尸检和活检材料。标本可来源于皮肤、淋巴结、息肉、溃疡、伤口或其他损害，也可以自于全身任何组织器官。 4.检测步骤：①直接镜检：对痰、窦道排泄物及气管冲洗液等临床标本直接镜检可以看到透明分支的菌丝及孢子。脓血或痰太粘稠时，可以10%KOH处理在行镜检。如果曲霉寄生在与空气相通的器官中，镜检时甚至可以看到曲霉头。一般培养基生长良好，如改良沙氏培养基或麦芽浸膏培养基，30℃~70℃培养，产孢结构丰富。 ②培养检查：强调培养条件的标准化，初代培养用沙氏琼脂培养基，次代培养用察氏琼脂或察氏酵母浸膏琼脂。培养温度为25°C，适高温的菌种可37℃；培养时间7~14天，部分可延长；用平皿点值，一点或三点。肉眼及低倍镜观察菌落；记录各项的形状、大小、颜色和纹饰等。 5.判断结果：①直接镜检：涂片见分枝（多为45°）、分隔的菌丝及足细胞。与外界相通腔道内的标本中有时可见分生孢子头（曲霉头），为曲霉的特征性结构。 ②培养检查：菌落的生长速度，表面质地、颜色、形态和气味等。其中分生孢子头形态结构及菌落颜色特征较稳定，是曲霉分类的主要依据之一。 6.临床意义：直接镜检阳性说明有曲霉属霉菌感染，但阴性不能除外诊断。 培养的意义：从临床标本中分离曲霉属霉菌，以确定是否有曲霉属霉菌感染及用于菌种保存及科学研究。 （注：各曲霉鉴定详见曲霉各论。）