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- 2018-03-02 发布于湖北
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一、基础知识提取DNA的方法和原理(1)提取生物大分子的思路:选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。(2)DNA粗提取方法:利用DNA与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异提取DNA去除其他成分。的性质(1)DNA的溶解性和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶不同利用这一特点选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解而使杂质沉淀或者相反以达到分离目的。不溶于酒精溶液但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精。(2)DNA的耐受性蛋白酶能水解蛋白质但是对 DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受 60~80 ℃的高温而DNA在80 ℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜但对DNA没(3)DNA的鉴定+二苯胺蓝色。二、实验设计实验材料的选取:选用 DNA含量相对较高的生物组织。破碎细胞DNA的滤液(1)动物细胞的破碎(以鸡血为例):在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水同时用玻璃棒搅拌过滤后收集滤液即可。(2)植物细胞的破碎(以洋葱为例):先将洋葱切碎然后加入一定的洗涤剂和食盐进行充分地搅拌和研磨过滤后收集研磨液。去除滤液中的杂质
方案一 方案二 方案三 利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质 直接在滤液中加入嫩肉粉反应~15 min嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 将滤液放在60~75_℃的恒温水浴箱中保温10~注意
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