[农学]基因工程.doc

第一章 绪论 第一节 基因工程的概念 一、概念 基因工程是在分子水平进行的遗传操作,指将一种或多种生物体(供体)的基因或基因组提取出来,或者人工合成基因,按照人们的愿望,进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另一种生物体(受体)的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。 基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程 由于被转移的基因一般需与载体DNA重组后才能实现转移 .因此：供体、受体和载体被称为基因工程的三大要素。 二、基因工程(gene engineering)常和以下名称混用 重组DNA技术(recombination DNA technique) 遗传工程(genetic engineering); 基因操作(gene manipulation); 基因克隆(gene cloning); 分子克隆(molecular cloning); 重组DNA技术:重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操程序，也称为分子克隆技术。 遗传工程 广义：包括细胞工程和基因工程。 狭义：就是基因工程。一般所说的遗传工程就是基因工程 克隆 作名词时指含有某目的DNA片段的重组DNA 分子或含有该重组分子的无性繁殖系。 作动词时是指基因的分离与重组过程。 三、基因工程的用途 分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源 大规模生产生物活性物质 设计、构建生物的新性状甚至新物种 第二节 基因工程的诞生与发展 一、基因工程诞生的理论基础 （一）理论上的三大发现 1.证实了DNA是遗传物质。 2.揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理。 3.遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定。 （二）技术上的三大发明 1.限制性核酸内切酶的发现与DNA的切割 2.DNA连接酶的发现与DNA片段的连接 3.基因工程载体的研究与应用 第三节 基因工程研究的主要内容 一、基因工程的主要内容 基础研究 克隆载体的研究 受体系统的研究 目的基因的研究 生物基因组学研究 应用研究等 (一）基础研究 自基因工程问世以来，基因工程的基础研究一直受到科技工作者的重视，主要包括： 构建一系列克隆载体和相应的表达系统 建立不同物种的基因组文库和cDNA文库 开发新的工具酶 探索新的基因工程新技术、新操作方法 （二）克隆载体的研究 1.研究克隆载体的意义 由于基因工程的发展与克隆载体的构建密切相关，因此，构建克隆载体是基因工程技 术的中心环节。 （三）受体系统的研究 1.受体是克隆载体的宿主,是外源目的基因表达的场所。 2.用于基因工程的受体的分类 原核生物: 原核生物大肠杆菌是早期被采用的最好受体系统，几乎是现有一切克隆载体的宿主。 真核生物：酵母菌是较早被用于基因工程受体的真核生物（酵母菌是十分简单的单细胞真核生物，基因组相对较小，有的菌株还含有质粒，便于基因操作）。建立了一系列工程菌株，不仅是外源基因（尤其是真核基因）表达的受体，而且是当前建立人和高等动物及高等植物复杂基因组文库的受体系统 高等植物：用于基因工程受体的一般是高等植物的愈伤组织、细胞和原生质体，也用部分组织和器官。 目前用于基因工程受体的双子叶植物有拟南芥、烟草、番茄、棉花等；单子叶植物有水稻、玉米、小麦等，并且也获得了相应的转基因植物。 高等动物：动物由于体细胞再分化能力差，目前主要以生殖细胞和胚细胞作为基因工程受体，并获得了转基因鼠、鸡、鱼等动物，动物体细胞用于基因工程受体主要是为获得系列转基因细胞系，或用于基础研究材料，生产基因工程 药物。人的体细胞同样可作为基因工程杂受体，获得的转基因细胞系可用于病理研究和基因治疗。 （四）目的基因研究 1.什么样的基因可以称为目的基因 总的来说，基因工程研究的基本任务是开发人们特殊需要的基因产物，则相应的基因就称为目的基因。 具体来说，具有以下特征的可被称为目的基因： 具有优良性状的基因 致病基因 目前还不清楚其功能的基因 2.获得目的基因的途径 构建基因组文库和cDNA文库，从而筛选出的基因。 应用PCR技术直接从某生物基因组中扩增出需要的基因。 对于较小的目的基因也可用人工化学合成。 3.目的基因的分类 第一类是与医药有关的基因 第二类是抗病虫害