[工学]载体.ppt

基因工程载体 授课教师：侯思宇 博士 联系电话 2012.9 本课主要参考书 吴乃虎主编 基因工程原理（上、下册） 陈宏主编 基因工程原理与应用 本课主要内容 质粒载体 噬菌体载体和柯斯载体 大肠杆菌表达载体 植物基因工程表达载体 病毒载体 第一章 绪论 基因工程载体的概念 基因工程载体的生物学特征 基因工程载体的种类 基因工程载体的应用 基因工程是要按人们的意愿去有目的地改造，创建生物遗传性，因此最基本的工程就是得到目的基因或核酸序列的克隆。分离或改建的基因和核酸序列不能自身繁殖，需要载体携带它们到合适的细胞中复制和表现功能。 载体：英文单词Vector，在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。 理想中基因工程载体的特征 能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。 容易进入宿主细胞，而且进入效率要高。 容易插入外源核酸片段，插入后不影响宿主细胞和其在细胞中的复制。要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。 容易从宿主细胞中分离纯化出来，便于重组操作。 有容易被识别的筛选标志，便于克隆操作。 载体的种类 质粒（Plasmid）载体 入噬菌体 柯斯质粒（Cosmid） M13噬菌体 杂交质粒 病毒载体，包括穿梭载体（Shuttle ） 细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC) 酵母人工染色体(yeast artificial chromosome，YAC) 来源于P1的细菌人工染色体（P1-derived artificial chromosome， PAC） 哺乳动物人工染色体（MAC，mamal artificial chromosome） 人类人工染色体（HAC，human artificial chromosome） 植物人工染色体(PAC) 基因工程载体技术的应用 基因工程载体技术实际上就是一种外源目的DNA片段体外重组技术。已作为按照人们意愿改造生物，改变遗传特征的一种手段。 各种各样的基因工程载体已经走进大千世界，广泛的应用于人类生活的各个方面中。 重组DNA技术与现代生物技术的发展 重组DNA技术与现代农业 重组DNA技术与生物制药业 重组DNA技术与现代工业 蛋白质工程和环境生物技术学 重组DNA技术与现代农业 作物转基因育种 就是根据育种目标，从供体生物中分离目的基因，经 DNA重组与遗传转化或直接运载进入受体作物，经过筛选获得稳定表达的遗传工程体，并经过田间试验与大田选择育成转基因新品种或种质资源。 转基因作物（GMC，genetically modified crops） 农业转基因技术的现状 中国转基因抗虫棉之父 抗虫棉--中国推广面积最大的转基因作物 经全国基因工程安全委员会批准商品化生产的作物已有： 我国自行研制开发的抗虫转基因棉花（转Bt及Bt+CpTI双价抗虫棉）； 2004年种植转基因棉花370万公顷，占棉花种植面积的50% 美国Monsanto公司开发的Bt抗虫棉； 延迟成熟期的转基因番茄； 抗黄瓜花叶病毒(CMV)转基因番茄； 抗CMV转基因甜椒； 转查尔酮合酶（CHS）反义RNA基因矮牵牛。 * * 质粒(plasmid ) ?Plasmid 独立于细菌染色体外的双链环DNA分子。 Plasmid chromosome ? ? 普通型载体pBR322的结构图 粘粒（cosmid） 能容纳大片段（45kb）的小分子（4kb～ 6kb）载体。 组成：质粒复制原点，抗药基因，多克隆位点，已连接入的λcos位点。 构建基因文库的λ载体 476bp片段含有E.coli的lacZ基因的 5’-序列，表达半乳糖苷酶的α片段。 LacZ的上游包括乳糖操纵子上的启动子Plac和操纵基因O。 lacZ之内是M13的多功能连接器。 Traditional crossbreeding Recombinant DNA techniques 自从1983年第一株转基因烟草获得以来，至今已有120种植物转基因获得成功。1996年全球大面积种植，并不断扩大。 国际农业生物技术应用服务局（ISAAA）统计结果 世界银行下属机构预测，世界范围内转基因作物产业的交易额： 2005年达到60亿美元； 2010年达到200亿美