浅论杀虫基因crylCa的人工合成、原核表达及其转基因水稻的培育.pdfVIP

摘要 摘要 在保证原有基因氨基酸序列不变的基础上，根据水稻密码子的偏好性及使用频 率，优化、改造crylCa基因，提高GC含量，去除影响mRNA结构不稳定因素的序 列，在crylCa基因前后增加有利于在植物中表达的前导序列和终止识别序列，以 BaMfI酶切位点添加于基因的两端等，最终合成全长为1912bp基因序列。 合蛋白表达和包涵体纯化，利用融合蛋白带有6个组氨酸标签的特点采用金属Ni 离子螯和亲和层析对变性溶解的融合蛋白进行纯化获得大小为67KDa的目的蛋白。 经复性后免疫新西兰大白兔，获得高特异性且效价为1：10000的多克隆抗体。 恢86，经Southern blot杂交分析表明crylCa基因已整合入水稻染色体基因组， ELISA的结果也表明目的基因已在水稻叶片中表达，表达量占叶片总可溶性蛋白的 因To代材料。 关键词：水稻，Bt，crylCa，农杆菌转化，鳞翅目，人工合成 { ·毒