[理化生]微生物的实验室培养.pptVIP

练习 1.不能作为异养微生物碳源的是（ ） A．牛肉膏　B．含碳有机物 C．石油　　D．含碳无机物 2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（ ） 　A．碳源　　B．氮源 　C．无机盐　D．生长因子 3.下列关于生长因子的说法中，不正确的一项是 （ ） 　A．是微生物生长不可缺少的微量有机物 　B．是微生物生长不可缺少的微量矿质元素 　C．主要包括维生素、氨基酸和碱基等 　D．一般是酶和核酸的组成成分 思考： . 获得纯净培养物的关键？ （2）灭菌 a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 ⑴培养细菌用的培养基与培养皿 ⑵玻棒、试管、烧瓶和吸管 ⑶实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌； （3）需要消毒。 P16旁栏思考 二.实验操作(以培养大肠杆菌为例) ㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基 1.计算 2.称量 3.溶化并调节PH 4.灭菌: 将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 5.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl(无机盐）、水、琼脂 倒平板操作 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（　　） 　　A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 　　B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸 　　C.待培养基冷却至50℃左右时，进行倒平板 　　D.待平板冷却凝固约5min～10min后，将平板倒过来放置 　　解析：选A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，故A项错误。 ㈡.纯化大肠杆菌:关键步骤—接种 平板划线法和稀释涂布平板法。 微生物的接种的常用接种方法有： 1、平板划线法:是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种稀释分散到培养基的表面,从而得到由单个细胞繁殖而来的菌落. 2、稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养.(分为系列稀释操作和涂布平板操作两步） 目的：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落，以便于纯化菌种 1.平板划线的操作方法 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 2.稀释涂布平板的操作方法 视频 4.菌种的保存 固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异 3.微生物的恒温培养：37℃恒温培养箱中培养12h-24h ⑵.长期保