影响肉羊胚胎移植效果的因素分析精选.docVIP

影响肉羊胚胎移植效果的因素分析郭宪，程胜利，杨博辉，焦　硕，冯瑞林（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州　730050） 摘　要：胚胎移植技术是肉羊繁殖中的一项高新技术。本文从实验记录、实验材料、环境因素、母体因素、人工授精、胚胎因素、操作者技术水平、移植后饲养管理等方面分析讨论肉羊胚胎移植中的影响因素，旨在分析肉羊胚胎移植中的质量控制点，为提高肉羊胚胎移植效果提供技术参考。关键词：肉羊；胚胎移植；质量控制 　　羊胚胎移植（EmbryoTransfer）技术是指对生产性能优良和遗传性稳定的母羊经过超数排卵处理后，将早期胚胎从体内取出，分别移植到受体母羊子宫内，使之产出优良后代的技术。胚胎移植技术是快速扩繁良种家畜的有效途经，随着胚胎工程技术的深入研究和商业化的推广应用，肉羊胚胎移植技术在不断完善和成熟，移植的效率和水平也在不断提高。但在胚胎移植的过程中，存在着多种因素直接或间接影响到胚胎移植的效果，以致影响胚胎移植最终的效率。本文拟从实验记录、实验材料、环境因素、母体因素、人工授精、胚胎因素、操作作者技术水平、移植后饲养管理等方面分析影响肉羊胚胎移植效果的因素，旨在为提高肉羊胚胎移植效率提供技术参考。 1　实验记录 　　信息采集是质量控制分析的基础。在肉羊胚胎移植中，首先要熟知胚胎移植的各个环节和程序，合理设计生产方案，明确实验目的和规范实验操作。羊胚胎移植的主要技术程序包括供、受体羊选择，供、受体羊同期发情处理，超数排卵，供、受体羊发情鉴定，配种或人工授精，胚胎的采集与鉴定，胚胎的移植与冷冻等。在肉羊胚胎移植的整个程序中，做好实验记录是关键。实验记录要全面、翔实，因为实验结果的分析来源于对记录的研究和分析。无论实验成功与失败，都要对整个实验程序作出全面的分析，并总结经验供下次实验参考与借鉴。对发情鉴定、人工授精、胚胎评定、胚胎移植等程序做出记录，是保证胚胎质量、提高羊胚胎移植效率的重要信息。 2　实验材料 2.1　激素　　超数排卵处理时，激素的剂量受母羊的年龄、胎次、子宫内环境、营养水平、体重等多种因素的影响。同时激素的种类、稀释、贮存、注射部位、注射方法等都对超数排卵效果有一定的影响。经产肉羊、初产肉羊的激素处理，应区别对待，根据种类和体重适量调整。2.2　试剂　　试剂质量的保证是羊胚胎移植质量控制的前提。胚胎移植中，培养液效果的好坏受营养成分、生产批次等各方面因素的影响。水是培养液的主要成分，容易出现污染，如溶解有离子化或非离子化的固体和气体、特殊物质、微生物和热原质，故使用无菌、超纯的水至关重要。纯化水的基本方法是玻璃蒸馏、去离子、过滤、逆渗透、吸收和超滤，应经常进行严格的质控检测以保证水的纯度。对水纯度检测最令人信赖的方法是检测电导性。水的质量和高度无菌条件是配制试剂的必须条件，用0.2μm滤器可以去掉所有细菌。培养液中另一主要成分是血清，血清成分十分复杂，不同批次的血清成分有差异。在实验时需对不同批次的血清进行检测，以选择最好的血清。在羊胚胎移植中，配制的培养液至少还需要检查pH值和渗透压。渗透压可以用渗透压计来测量或者通过观察红细胞的收缩和膨胀来粗略的判定。pH值可通过pH计或pH试纸来测定。无菌性，可在37℃过夜培养样本并在第2天检查微生物来判定。毒性，可通过培养小鼠的2-细胞胚胎，检查是否能支持其发育来确定。如果使用石蜡油，同样要检查它的无菌性和毒性。试剂和药品的贮存和放置，应严格区分和合理保管，同时溶液的配制要准确并保持无菌，避免发生称量错误。每一批培养液都要贴上标签并冷冻储藏，直到产生一定的受胎率。2.3　设备和耗材　　设备和耗材应无毒无菌或正确使用。实验室保持干净、整洁无菌条件的同时，培养箱、离心机、电子天平、超净工作台、显微镜、冰箱等常用仪器设备和过滤除菌装置、手术器械、培养器皿、移液器等以及消耗性材料都应保持高度的无菌条件。在准备培养液时，将有关玻璃容器充分而仔细地冲洗干净并作灭菌处理。 3　环境因素 　　由于受光照等因素的影响，肉羊大多数是季节性发情。温度、湿度对肉羊影响较大，高温、高湿对肉羊造成热应激，受热应激的肉羊采食量下降，能量负平衡，黄体酮水平增高，影响发情期的LH分泌，表现为肉羊不发情，受孕率下降，出现异常胚胎、胚胎早期死亡和流产，影响同期发情和超数排卵的成功。因此，肉羊的胚胎移植要尽可能的接近其自然繁殖的规律，最好避开5～9月份的高温季节。当管理或气候条件不是很理想时，定期检测血液中的孕激素很重要。例如在超数排卵和胚胎移植前监控供体和受体体内的孕激素的基础水平，就可以知道热应激和其他因素的应激对发情效率的影响，同时也可以获取孕激素正常变化曲线。为适时进行超数排卵和胚胎移植提供依据，这样有助于提高所获胚胎的质量和移植的受胎率。 4　母体因素 4.1　供体　　供体母