苯丙氨酸解氨酶活力测定.pptVIP

实验5 苯丙氨酸解氨酶活力和比活力测定 目的要求 学习常用酶活力测定方法 掌握苯丙氨酸解氨酶活力和比活力测定的原理和方法 了解紫外分光光度计及其使用 原理 苯丙氨酸解氨酶（PAL,EC4.3.1.5）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切有关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。PAL 催化 L- 苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 处有最大吸收值。若酶的加入量适当，A290 升高的速率可在几小时内保持不变，因此通过测定 A290 升高的速率以测定 PAL 活力。规定 1h 内 A290 增加 0.01 为 PAL 的一个活力单位。 * * 酶的比活力是指样品中每毫克蛋白质所含的酶活力单位数。为求得PAL的比活力，除了测定PAL的活力（用活力单位表示）之外，还必须测定蛋白质含量（用毫克数表示）,本实验采用考马斯亮蓝法测定酶液蛋白质含量。 比活力可用来比较酶制剂的纯度。 材料 本实验选用发芽5-6天的小麦幼苗为实验材料 仪器 722s型分光光度计、TU-1900双光束紫外-可见分光光度计、