[医学]miRNA.ppt

; 讲 述 内 容 1.miRNA的研究背景 2.miRNA的含义 3.miRNA的特点 4.miRNA的合成途径 5.miRNA的研究思路 6.miRAN与si 、sh的区别;研 究 背 景;尽管早在1993年，科学家就发现了第一个microRNA，但直到2003年以后，这种小RNA分子的大作用才不断被发现。研究显示：miRNA通过与转录本的相互作用，关闭或抑制基因的表达，调控至少 30% 以上的基因表达，参与多种生理病理过程 。 ;miRNA在多个组织中，例如正常和肿瘤组织中差异表达。因此，通过表达谱分析寻找疾病相关miRNA并进行发病机理研究，最终应用于肿瘤诊断和治疗，已经成为目前miRNA研究的重要方向。;在研究中，从深度测序，miRNA芯片到通过导入化学合成的mimics antag omirs等实现miRNA过表达和抑制，都是研究常用的方法. ;miRNA的文献计量分析;miRNA的文献计量分析---词频分析; miRNA ? ? ?; microRNAs （简称miRNA）是一类进化上高度保守的小分子非编码RNA，长度大约22nt左右，5′端有一磷酸基团, 3′端为羟基, 这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA 的降解片段区别开来,具有高度保守性、时序性 、和 组织特异性,具有转录后调控基因表达的功能.;miRNA由基因编码，从DNA转录而来， 但不翻译成蛋白。初级转录产物（primary transcripts，pri-miRNA）缩短其颈环结构得到功能性的miRNA。成熟的miRNA分子与一个或更多个mRNA分子部分互补，其主要 功能是下调基因的表达。而microRNA这个概念第一次在2001年Science (26 October 2001)的文章中出现。; 合成途径???;编码miRNA的基因可能位于功能基因编码区、非编码区，可能成簇表达或独立表达。 在细胞核内，基因组DNA 转录生成较长的pri-pre-microRNA，之后被Drosha酶切割pri-pre-miRNA成形成长度大约70-100 碱基的、具发夹结构的pre- microRNA。;这些发夹结构的RNA 被核输出蛋白exportin5转运到细胞质，在胞浆中的Dicer 酶切割形成19-23nt 大小的成熟的miRNAs 产物。成熟的单链miRNAs 与一系列蛋白形成miRNA诱导的沉默复合物(miRISC)，结合于靶mRNA的3ˊ-UTR区，阻止所结合的mRNA 的翻译或直接降解靶miRNA。;每个miRNA可以调控多个（甚至上百个）靶基因，而特定靶miRNA也可以同时被多个miRNAs调节。和编码蛋白的mRNA相同，miRNA基因上游同样有启动子，启??子区的CpG岛发生甲基化，也会影响下游基因表达。在一些肿瘤细胞（例如淋巴瘤）中，miR-34a上游CpG岛发生甲 ;基化导致miR-34a表达水平降低；而在另一些肿瘤细胞（如胰腺癌）中，TP53突变产生同样结果，显示了miRNA表达调控的多层次。另外，基因缺失，重排等，以及环境因素，例如缺氧等，都会影响miRNA的表达。;序列（特别是种子序列）高度同源的miRNA被归为一个miRNA家族，但这些miRNA并不一定是成簇表达的。同一miRNA家族成员功能近似（但靶基因并非完全相同）。 ;例如miR-34 家族3个成员miR-34a、b、c，其中，miR-34a位于1号染色体1p36基因座位，单独表达；而miR-34b和-34c位于11号染色体11q23基因座位，成簇表达（图1），但它们都具有相同的种子序列（图1），并且都受到转录因子TP53的调控。;miRNA主要研究方法;miRNA研究; dsRNA： 双链RNA（double-stranded RNA, dsRNA）是一种有互补链的RNA，与细胞中发现的DNA相似，dsRNA构成了一些病毒（双链RNA病毒）的基因组。像病毒RNA或siRNA之类的 双链RNA能够促发真核细胞中的RNA干扰，引起脊椎动物中的干扰素反应。;shRNA：小发卡或短发卡RNA（a small hairpin RNA or short hairpin RNA, shRNA）是一段具有紧密发卡环（tight hairpin turn）的RNA序列，常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。利用载体把shRNA导入细胞，载体中的U6 启动子确保shRNA总是表达；这种装载了shRNA载体可被传递到子代细胞中去，从而使基因的沉默可被遗传。;shRNA的发卡结构可被细胞机制切割成 siRNA，然后siRNA结合到RNA诱导沉默复合物上（RNA-induced silencing complex，RISC），该复合物能够结合