锌和维生素e对糖尿病大鼠内皮细胞保护作用的研究教材幻灯片.pptVIP

锌和维生素E对糖尿病大鼠内皮细胞保护作用的研究 原理 糖尿病血管并发症是糖尿病患者的主要死因。目前认为内皮细胞功能紊乱是糖尿病血管并发症的基础。 前列腺环素(PGI2)和血栓素A2 (TXA2)和内皮素(ET)是血管内皮细胞分泌的血管活性物质,参与内皮功能调节。糖尿病时,高血糖引起的氧化应激参与血管内皮功能紊乱。锌和维生素E是抗氧化剂并具有细胞保护作用。本实验旨在探讨两者对糖尿病大鼠氧化应激和血浆PGI2, TXA2和ET的影响。 主要试剂与仪器 链脲佐菌素(STZ) :美国Sigma公司产品; ZnSO4·7H2O:北京双环化学试剂厂,分析纯; 干酪素:北京双旋微生物培养基制品厂,生化试剂; I125 -胰岛素放射免疫试剂盒、I125 -内皮素放射免疫试剂盒、 I125 -6 -酮-前列腺素F 1α放射免疫试剂盒、 I125 -血栓素B2放射免疫试剂盒:北京东雅生物技术研究所; 血清丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T - AOC)试剂盒:南京建成 生物制品研究所产品; SBA- 40C生物传感分析仪,山东省科学院生物研究所; SN一682放射免疫γ计数仪,上海。 动物模型建立及分组 雄性SD大鼠50只,体重140-150 g。动物适应性喂养一周,按体重随机 分为正常对照组(10只)和实验组(40只),各组大鼠禁食12h后,实验组大 鼠以60 mg/kg·bw)的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1 mol/L, pH = 4.4的枸橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11 mg/ml的STZ溶液),正常对照 组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量 变化等情况。一周后,采尾血测血糖,以血糖浓度16.6mmol/ L,饮水 量40 ml/d,尿糖强阳性(+++~++++)的大鼠作为糖尿病大鼠。选取 糖尿病大鼠36只按血糖值参考体重分为4组:糖尿病对照组(DM),糖尿病 补锌组(DM十Zn),糖尿病补VE组(DM + VE),糖尿病补Zn和VE组(DM +Zn+ VE)。 动物模型建立及分组 各组动物均喂饲人工合成饲料,合成饲料控制锌浓度为20 mg/kg。正常对照组和DM组给予去离子水;补Zn组给予Zn浓 度为20 mg/L的含ZnSO4·7H2O去离子水;补VE组每天以50 mg/kg VE灌胃;Zn和VE联合补充组在给予Zn浓度为20 mg/L 的含ZnSO4·7H2O去离子水的同时以50 mg/kg VE灌胃。实验 期间,密切观察动物进食和饮水量变化,每周称两次体重,6 周末时,戊巴比妥麻醉,股动脉取血,测定有关指标。 方法 测定指标:全血血糖测定,血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)以及总抗氧化能力(T-AOC)测定,血清胰岛素、血浆血栓素B2 (TXB2 ) , 6 -酮-前列腺素F 1α (6-k-PGF1α )和内皮素(ET)测定。 质量控制:实验用鼠笼、食盒及配饲料用具均用1%EDTA·Na2 (乙二胺四乙酸钠)溶液浸泡,配制饲料时戴口罩和一次性手套,防止锌污染。每天清洁实验室,保持 室温20~25℃,湿度40%~60%。 注:1%EDTA·Na2用于消除实验用具和饲养环境中混入锌元素的影响。 统计分析:采用分析软件进行多组间比较的方差分析。