饲料及其原料中尿素检测方法的研究进展论文报告.docVIP

饲料及其原料中尿素检测方法的研究进展 1??DMAB法 目前多数文章及标准中均使用DMAB法检测饲料或原料中的尿素，例如，SC/T3510-1996、GB/T 19164-2003、AOAC 941-2004、IS0 6654 -1991等。该方法的原理为DMAB与尿素反应，生成黄色的对二甲胺基甲醛脲，此物质的颜色深度与溶液中尿素含量成正比，因此可以通过测定在一定波长下反应溶液的吸光值来定量溶液中的尿素浓度，该反应需要在酸性条件下进行。 从相关报道来看，此方法在应用中主要涉及两方面：饲料样品的前处理和与DMAB试剂的反应。综合各方文献，样品前处理所采用的方法基本相同，即使用木炭作为吸附剂吸收饲料溶液中的色素，防止溶液浑浊对后续反应吸光值的测定产生干扰；利用乙酸锌和亚铁氰化钾反应生成亚铁氰酸锌来共沉淀样品中的蛋白等潜在干扰物质。大多研究者指出溶液中加入样品及试剂后摇匀静置20 min左右，待沉淀完全即可过滤，而武金凤等(2008)报道，应用此方法处理鱼粉样品时，为了使尿素完全提取，还需要将溶液振荡30 min再静置至沉淀沉积，这与ISO( 1991)、崔淑文和马车覆(1993)的方法基本相同。根据笔者的经验，从实验结果的可靠性来考虑，实际样品测定中应用先振荡后静置的操作过程能够较好保证测定结果的准确性，减少可能由于提取引起的误差。样品经过前处理后，即可从中取适量上清液加入试管中与一定量DMAB显色剂进行反应，在这一操作中需要考虑的问题主要是待测样品液的取样量和反应温度，其中取样量与样品中的尿素浓度和反应体系的测定范围有关。翟毓秀(1993)报道，样品经过前处理，尿素含量在1%以下取15 mL、1%以上取5 mL加入25 mL反应管中，然后加水至18 mL，再加入5 mL DMAB试剂用水定容，室温放置10 min，在420 nm波长下测定溶液吸光值。崔淑文和马车覆(1993)报道，鱼粉样品经过前处理后直接取5 mL滤液于试管中，加5 mL DMAB溶液，充分振摇后置于25℃水浴中10 min，取出即可于420 nm波长下测定反应溶液的吸光值。武金凤等(2008)在实验中吸取含氮量为0.2~10 mg的滤液5 - 10 mL加入25 mL反应管中，再加5 mL DMAB溶液，用水定容至刻度后混匀放置20 min,实验结果表明，反应溶液在25℃水浴和常温条件下放置20 min，测定结果无显著性差异。??? 杨珩和吴玉生(1997)还提出了一种简单、快速的试纸条定性、半定量测定法，该方法应用预先经10%硫酸氢钾和2%DMAB溶液浸泡制备的试纸条，将其插入样品溶液中（此样品溶液无需加入木炭、乙酸锌与亚铁氰化钾处理），根据2 rain内试纸条颜色的变化即可定性溶液中尿素的有无（试纸条呈黄色即为尿素阳性），其检出限为0.01%：而将测定后的试纸条与已知尿素浓度下的试纸条颜色进行对比即可实现样品溶液中尿素的半定量。 DMAB法虽然较为常用，但由于其试剂本身在420 - 436 nm具有较高的吸收值，所以操作过程中要严格控制显色剂的加入量，一般推荐添加试剂5 mL。陈灵华(1998)指出。试剂空白吸收程度随测定波长的增大而下降，同样波长下样品吸光值的变化则不大，所以推荐可以使用440 nm作为测定波长，这样就可以尽量减少由于试剂添加量变化而引起的误差，从武金凤等(2008)报告中的反应溶液扫描图谱也可以看到波长为420~440 nm时，吸光值无显著性变化，因此，本方法测定饲料样品的进一步实验中可以探讨在这两个波长下试剂吸收有无显著性差异，以确定反应溶液的最适测定波长。 2甲酚红法 甲酚红是滴定分析中常用的一种指示剂，浓度为0.1%溶液的变色范围为pH 7.2~8.8（黄色变为红色），此颜色变化通过肉眼即能明显分辨。 应用甲酚红法测定饲料中尿素的主要原理是尿素在脲酶水解作用下产氨而使溶液pH升高，引起甲酚红溶液颜色发生相应变化，从而根据颜色是否发生改变及深浅来定性半定量溶液中尿素的有无和含量。 当前研究一致认为该方法具有简单、快速、准确、灵敏等优势，因而可以在样品快速测定中予以推广使用。孙新来和赵慧(1990)报道，通过30多次实验分析，表明将新鲜黄豆中提取的脲酶应用于其改进的甲酚红显色法中，反应在30 s开始显色、尿素检出率达100%、灵敏度达0.01%，与购买商品化脲酶相比具有明显的经济优势。在《饲料显微镜检与质量控制手册》一书中，作者推荐测定样品时同时测定一系列尿素标准溶液(0~5%)，在10 - 12 min观察比较样品与标准溶液的显色，可以半定量样品中的尿素浓度。孟丹胜(1994)详细介绍了应用甲酚红检测饲料中尿素含量的过程及可能遇到的问题和解决方法，其中主要包括试剂纯度和有效性的检验，测定结果假阳性和假阴性的排除。 从应用该方法检测血