妇幼保健院检验科产前诊断操作规程SOP文件.docVIP

妇幼保健院检验科-产前诊断操作规程SOP文件 导读：就爱阅读网友为您分享以下“妇幼保健院检验科-产前诊断操作规程SOP文件”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对92的支持! 后使用； 本试剂盒亦可用于培养的细胞基因组DNA的提取；此基因组DNA可用于PCR扩增、限制性内切酶消化等不同的分子生物学实验。 （三）羊水DNA快速提取操作步骤: 1、8mL羊水8000rpm离心5分钟，弃去上清小心保留管底沉淀，把管底白色沉淀转移到1.5mL离心管中。（或在1.5mL离心管中加入充分混匀的羊水样本，8000rpm离心5分钟，弃去上清重复以上操作5-6次收集沉淀细胞。） 2、细胞沉淀液转移到1.5mL离心管后，8000rpm离心5分钟，用微量移液器小心吸走部分上清，保留50μL的沉淀，加入125μL充分摇匀的变性液，充分混匀后室温放置5分钟。 3、8000rpm离心5秒钟，弃去上清，将离心管倒置在吸水纸上片刻，小心保留管底沉淀。在沉淀中加150μL洗涤液I，旋涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000rpm离心5秒钟，小心弃去上清。将离心管倒置在吸水纸上片刻，小心保留管底沉淀。共洗涤3次。 4、在沉淀中加250μL洗涤液II，旋涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000rpm离心5秒钟，小心弃去上清。将离心管倒置在吸水纸上片刻，小心保留管底沉淀。共洗2次。 5、最后在沉淀中加250μL无水乙醇，旋涡振荡器上充分悬浮沉淀，8000rpm离心5秒钟，小心弃去上清。将离心管倒置在吸水纸上片刻，小心保留管底沉淀。 6、沉淀置于真空旋转干燥仪中干燥约5-10分钟或者56干燥箱中干燥20分钟以上，当沉淀完全干燥成白色粉末后加入50μL溶解液并混匀。离心管置于56保温10分钟。8000rpm离心5秒钟，将含有基因组DNA的上清液移到一支新的离心管中。 7、注： 变性液使用前必须充分摇匀； 乙醇必须干燥完全，有机溶剂抑制PCR扩增。 （四）PCR扩增操作流程 1、所需物品和设备 设备：离心机、微量移液器(1000?l, 200?l, 50?l,10?l)、PCR扩增仪、超净工作台 材料： PCR扩增管、已灭菌的移液器吸头（1000 ?l, 200 ?l, 10 ?l）、PCR反应液、一次性手套、一次性吸水纸，冰盒或冰袋、专用工作服和工作鞋、专用办公用品等。 2、PCR前准备 2.1、在PCR扩增仪上设定所要使用的PCR扩增程序