基因工程研究教材_课件.pptVIP

(五) 利用PCR技术进行鉴定 利用PCR技术可以对目的基因等特异核酸进行鉴定。 抽提少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析→ 与已知序列比对 (六) 利用免疫学方法进行筛选鉴定 原理:以目的基因在受体细胞中的表达产物(多肽)作Ag,以该基因产物的免疫血清作Ab,根据抗原─抗体反应,即可筛选并鉴定出目的基因克隆及其产物 方法:放射性抗体检测法、免疫沉淀检测法、酶联免疫吸附检测法等 1、放射性抗体检测法 转化菌体涂布在琼脂培养基平板上→出现菌落后,将其影印到另一琼脂平板上继续培养,保留母板→待影印琼脂平板上的菌落长好后,将其置于含有氯仿饱和气体的容器中使菌落裂解,阳性菌落便释放出抗原→将吸附了未标记IgG抗体的聚乙烯薄膜覆盖在琼脂平板表面。如果抗原与抗体具有对应关系,在薄膜上就会形成抗原─抗体复合物→取下聚乙烯薄膜,再用125I标记的IgG处理,125I─IgG便会与结合在聚乙烯薄膜上的抗原决定簇结合→漂洗聚乙烯薄膜,除去过剩的125I─IgG,在空气中使之干燥→作放射性自显影,判断结果→从母板上获得所需重组克隆。 自学内容 免疫沉淀检测法 酶联免疫吸附检测法 转译筛选鉴定法 2、免疫沉淀检测法 抗特定蛋白的 抗体 菌落细菌分泌这种蛋白 菌落细菌分泌其他蛋白 抗原-抗体沉淀白圈 3、酶联免疫吸附检测法 抗原固定在固相载体上,加入抗体、酶标