四倍体刺槐枝条韧皮部总蛋白质双向电泳体系建立及应用-生物技术通报.PDFVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 1 四倍体刺槐枝条韧皮部总蛋白质双 向电泳 体系建立及应用 1 1，2 1 1，2 1 1 张胜  赵忠   刘昭军  张博勇   宗建伟  张玲玲 （1. 西北农林科技大学林学院，杨陵 712100 ；2. 西北农林科技大学 西部环境与生态教育部重点实验室，杨凌 712100） 摘 要 ： 采用TCA/ 丙酮法对四倍体刺槐枝段韧皮部全蛋白质进行提取，通过对IPG 胶条pH 梯度、分离胶浓度的选择，上样量、 等电聚焦条件的优化，建立起四倍体刺槐枝段韧皮部蛋白质双向电泳体系。研究结果表明：采用TCA/ 丙酮法提取四倍体刺槐枝段 韧皮部全蛋白质，选用pH4-7 的17 cm IPG 胶条，考马斯亮蓝染色上样量550 μg ，等电聚焦IEF 聚焦总伏小时数从60 000 Vh 提高 到80 000 Vh ，并采用12% 的分离胶对四倍体刺槐枝段韧皮部全蛋白进行双向电泳，能得到背景清晰、蛋白质点数相对较多，分离 度高且重复性好的电泳图谱。利用建立的体系进行双向电泳分离蛋白质，能直接挖点送质谱分析。采用该体系分析四倍体刺槐硬 枝扦插生根愈伤组织阶段蛋白质表达差异，共筛选出83 个差异蛋白质点，其中上调蛋白15 个，新产生蛋白22 个，下调蛋白22 个， 缺失表达24 个。 关键词 ： 四倍体刺槐 韧皮部 双向电泳 优化方法 差异蛋白质分析 - Establishment and Application of Two dimensional Gel Electrophoresis for Proteome from the Phloem of Tetraploid Robinia pseudoacacia 1 1，2 1 1，2 1 1 Zhang Sheng Zhao Zhong Liu Zhaojun Zhang Boyong Zong Jianwei Zhang Lingling （1. ， ， 7 12100 ； 2. College of Forestry Northwest A F University Yangling Ministry of Education Key Laboratory of Environment and Ecology ， ， 7 12100 ） in Western China Northwest A F University Yangling Abstract:  This paper used the method of TCA/acetone to extract all