免疫酶斑点试验教材_课件.pptVIP

myszjpwd-myxr-xm 免疫酶斑点试验 Dot-ELISA 1.免疫酶斑点试验 2.录像:单克隆抗体的制备 实验内容 实验目的 2.了解免疫酶斑点技术的用途。 1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法。 3.了解单克隆抗体制备过程。 免疫酶斑点技术的原理 硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力, 在中性条件下即可有效地吸附蛋白质等生物大分子。 将免疫物质吸附于纤维素膜后,则可利用纤维素膜作为固相进行抗原抗体反应。 免疫酶斑点技术的特点 1.Ag-Ab反应,具有高特异性; 2.酶催化作用的高效性,具有高敏感性; 3.NC膜的运用 (1)微量抗原的检测 (2)抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的筛选 (3)自身抗体的检查 一、实验内容 免疫酶斑点试验 检测微量人IgG 二、实验材料 Ag:人IgG 阴性对照:NS 酶标记抗体:羊抗人IgG 酶:辣根过氧化物酶(HRP) 底物:邻苯二胺(OPD) 封闭液:5％脱脂奶粉 洗涤液:磷酸盐缓冲液; 三、实验方法(直接法) 1.取硝酸纤维素膜片,待干后用笔做好标记; 2.将稀释的抗原液5-10μl和NS分别加于相应格内,室温自然干燥! 3.将膜片放入封闭液中震荡封闭1