利用crispr_cas9技术构建ctcf蛋白降解细胞系_谢德健.pdfVIP

遗传 Hereditas (Beijing) 2016 年 7 月, 38(7): 651―657 研究报告 利用CRISPR/Cas9 技术构建CTCF 蛋白降解细胞系 谢德健，师明磊，张彦，王天艺，沈文龙，叶丙雨，李平，何超，张香媛，赵志虎 军事医学科学院生物工程研究所，北京 100071 摘要: CTCF 是脊椎动物关键的绝缘子蛋白，在细胞生命过程中发挥重要作用，敲除 CTCF 基因会导致小鼠胚 胎死亡。为进一步探讨CTCF 的功能，本文利用CRISPR/Cas9 介导的同源重组，在内源性 CTCF 表达框上游敲 入一个有丝分裂期降解结构域(Mitosis-special degradation domain, MD) ，该结构域可以带动CTCF 融合蛋白在M 期降解。作为对照，将MD 结构域的第42 位的精氨酸突变为丙氨酸，形成无降解活性的MD* *