[理学]2011-009电泳2.ppt

上午7时54分 1 第9章 蛋白质电泳技术 ( Electrophoresis) 主讲：孙立权 §9-8 高效毛细管电泳分析 1 概述 generalization 2 高效毛细管电泳的理论基础 basic theory of HPCE 3 高效毛细管电泳仪器 high performance capillary electrophoresis apparatus 4 高效毛细管电泳的分离模式 separate types of HPCE 5 应用与进展 application and advances of HPCE 2018-3-3 1 概述 1937年，Tiselius(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白； 发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 第一次的自由溶液电泳；第一台电泳仪； 1948年，获诺贝尔化学奖； 二十世纪三十年代以后，电泳真正成为一门分离技术，在生物化学发展进程中起了重要作用。 电泳技术的发展与生物化学中对蛋白质和酶的研究有密切的关系，同时也与电绝缘材料、检测器和电子学的发展分不开。随着科学技术的发展，也发展了形式多样的电泳技术。 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无法与其他分析相比 2018-3-3 5 1967 Hjertern 提出细径管在高压电场下进行电泳可以抗对流和减小热扩散，并使用慢速旋转3mm 内径石英管，UV检测器，成功分离了无机和有机离子，蛋白质，多肽，核酸等。但操作麻烦。 证明了 200～300m 内径玻璃和聚四氟乙烯中进行电泳可抗对流和减小热扩散。 1974 Virtanen 认为必须使用细毛细管才能提高分离效率。 高效毛细管电泳以其独特的优点而得到迅猛的发展。 Everaerts Mikker 等证实了用毛细管来抑制对流和增强散热效果，以提高分离效率。使用200 m 内径聚四氟乙烯管，UV检测器，分离了16种有机酸，理论塔板数达到18万/米。这是毛细管电泳发展史上的一个重大突破。该工作实际上是毛细管电泳的开创性工作。由于检测器灵敏度的限制，进样量大，导致峰形不好，没有引起人们的重视。 2018-3-3 6 1981 这是毛细管电泳发展史上的里程碑。 80年代初轰动分离科学界的实验 1981年 Jorgenson和Luckas 用75m内径石英毛细管进行电泳，采用电迁移进样和灵敏的荧光检测器在线检测，在30kV电压下使丹酰化氨基酸快速分离，柱效高达40万/米理论塔板数，这样高的柱效是以前的分离方法所从未达到的(Jorgenson J W, Lukacs K D. Anal. Chem. 1981,53:1298)，并进一步讨论了影响柱效的因素。 还报道了在170m内径的毛细管中填充了10 m粒经的 Partisil ODS-2填料，在电场作用下成功地分离了多环芳烃，柱效高达31000理论塔板数，这是电色谱的雏形。 2018-3-3 7 1983-1985 Hjerten 先后提出毛细管凝胶电泳，毛细管等电聚焦法，不仅提高分离效率，并实现了自动化操作，可以定性定量分析。 1984 Terabe 运用含SDS胶束的缓冲液分离了中性组分，从而建立MEKC（胶束电动毛细管色谱）模式。 1986 Lauer 报道其在蛋白质的毛细管电泳分离中获得百万/ 米的极高效率。 1988 毛细管电泳商品仪器推出 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)--High Performance Capillary Electrophoresic或毛细管电分离法(CESM)，它是离子或荷电粒子以高压直流电场为驱动力，在毛细管中按其淌度或/和分配系数不同进行高效、快速分离的一种新技术。 HPCE最基本的仪器结构示意图如图所示 2018-3-3 9 自90年代初开始，毛细管电泳的理论研究日臻完善，应用范围迅速扩展，已经成为分析化学的前沿领域，并迅速成为色谱法的竞争者。迅速崛起的TAS(微流控芯片)就是以毛细管电泳为核心技术 毛细管电泳 毛细管开管电泳 毛细管涂层电泳 毛细管电色谱 微流控芯片 2018-3-3 高效毛细管电泳分析 在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管,； 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加。 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达几十万