[理学]第7章色谱分离过程2011.pptVIP

7 .1概述 色谱又称为色层或层析，是指多种成分的混合物，由于在流动相和固定相中有不同的分配，在流动过程中，经多次分配后而获得分离。 色谱是适应科技和生产需要发展起来的一种新型、高效、节能的分离技术，目前在工业生产中应用的色谱分离技术主要是中、高压液相色谱。 色谱分离技术是迄今为止人类掌握的对复杂混合物分离效率最高的一种方法。 色谱分离过程具有如下特点。 (1)应用范围广 从极性到非极性、离子型到非离子型、小分子到大分子、无机到有机及生物活性物质、热稳定到不稳定的化合物都可用色谱方法分离，尤其在生物大分子分离和制备方面，是其他方法无法替代的。 (2)分离效率高 若用理论塔板数来表示色谱柱的效率，每米柱长可达几千至几十万的塔板数，特别适合于极复杂混合物的分离，且通常收率、产率和纯度都较高。 (3)操作模式多样 在色谱分离中，可通过选择不同的操作模式，以适应各种不同样品的分离要求。 如可选择吸附色谱、分配色谱和亲和色谱等不同的色谱分离方法;可选择不同的固定相和流动相状态及种类;可选择间歇式和连续式色谱。 （4）高灵敏度在线检测 在分离与纯化过程中，可根据产品的性质，应用不同的物理与化学原理，采用不间的高灵敏度检测器进行连续的在线检测。从而保证了在达到要求的产品纯度下，获得最高的产率。 7.2色谱分离过程的基本原理 7.2.1分离原理 色谱分离过程的实质是溶质在不互溶的固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在两相间分配行为的差别而使不同的溶质分离。不同组分在色谱过程中的分离情况首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异。图7-l是对色谱分离过程原理的简单图示。 7.2.2 固定相(色谱柱填料) 色谱柱填料分为球形颗粒填料和不规则形状颗粒填料，前者具有较大的优势。它有较高的机械强度，不易破碎，柱的填装重现性好，并可增加样品在柱中的渗透性，虽价格较高，但其使用寿命较长。选择合适的柱填料不仅应考虑其化学性质，还应考虑颗粒大小、色谱柱长度、操作压力等因素，才能得到好的分离效果。 (1)硅胶衍生的固定相 大孔硅胶是最重要的色谱固定相，固定相颗粒及大小已由经典的无定型大颗粒（40-60μm或更大)发展到目前的球形高效细颗粒(10-20μm或更小)。 (2)离子交换树脂 离子交换树脂可分为强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂。 可用于葡萄糖和果糖的分离及蛋白质的分离与提纯。质子化的强离子交换树脂能用于分离高度氧化及脱水的二萜类化合物。 (3)大孔吸附树脂 大孔吸附树脂是单体在聚合物过程中，同时加入适当的发泡剂聚合而成的球形颗粒。按其极性分为极性、非极性及中间极性三种类型。它具有化学稳定性和机械稳定性能较好，吸附容量大和再生容易的优点，其应用十分普遍。 (4)凝胶 根据凝胶的材料不同，可分为有机凝胶和无机凝胶。有机凝胶一般是交联的高聚物，根据其交联度的大小可以溶胀，柱的效率离，但易老化，热稳定性和机械强度都较差。无机凝胶的柱分离效率较差，但性能稳定易于掌握。亲水性凝胶用于生化产品的分离，亲油性和两性凝胶适用于合成高分子材料的分离。 (5)手性固定相 常用手性固定相主要是以下两类:一类是纯的手性有机聚合物或以其覆盖的多孔担体，包括寡糖和多糖、聚丙烯酸酯和由蛋白质衍生的固定相:另一类是通过对担体(如硅胶)表面进行手性化学修饰所获得的物质，修饰剂包括氨基酸衍生物、冠醚、金鸡纳生物碱、碳水化合物、酒石酸衍生物、环糊精和双萘类化合物。 7.2.3色谱柱及柱技术 色谱柱是色谱技术的核心，因为无论应用何种色谱方法，样品都是在色谱柱中实现分离的。制备型色谱柱尺寸大，且负载样品量大，因而制备色谱柱成为制备色谱法的技术关键。 色谱柱的性能依赖于三个因素:色谱柱填充技术、柱设计和生产。 (1)色谱柱装填方法 色谱柱装填方法一般有五种，高压匀浆填充、干法填充、径向压缩法、轴向压缩法和环形压缩技术。而对于中型或大型制备色谱柱的装填主要采用后三种方法，如图7-2所示。轴向压缩法又分为动态轴向压缩法(DAC)和普通轴向压缩法，二者的区别在于在DAC法中，色谱柱在使用过程中仍保持一定的压力，从而处于压缩状态。 动态轴向压缩法的基本原理是利用一可移动的活塞将装入色谱柱的填料匀浆压实，在洗脱过程中，色谱柱柱床始终保持一固定的压力，从而保证柱床维持稳定、均匀且没有空隙形成。DAC技术解决了色谱法放大过程中，大直径色谱柱的装填问题，且能保证稳定的柱效能，最大的动态DAC色谱柱内径达16oomm。 (2)色谱柱设计 柱设计是影响色谱柱性能的关键因素