[生物学]艾滋病实验室检测技术.pptVIP

HIV内部结构 受检对象 有高危行为者，比如不洁性行为、 吸毒等 受血及血制品者、包括器官移植 有艾滋病临床症状的人 献血、器官捐献者 职业暴露者 意外事故 初筛检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 快速检测及其它检测 斑点法：斑点EIA或斑点ELISA（dot-EIA） 斑点免疫胶体金（胶体硒）快速试验 凝集法 其它快速筛查试验方法 艾滋病唾液尿液检测试剂 酶联免疫试验 ( ELISA ) ELISA四代试剂比较 酶联免疫法假阳性的原因 快速检测试验 特点 普通室温下可以完成，无需特殊仪器 操作简便、快速 判读受主观因素影响 适用范围 野外、紧急情况 、VCT （一）斑点杂交试验 原理 将人工合成或重组的HIV抗原吸附于固相膜上，膜下有垫片吸收血清和试剂，一个塑料膜具起固定支撑作用，标本中的HIV抗体与膜上的抗原结合，再加入酶标记抗人IgG，洗涤后加入底物，在膜上可出现肉眼可见的颜色斑点。 （二）胶体金（硒）和蛋白A体系 （三）凝集试验 凝集试验原理 凝集试验注意事项 前滞现象的形成 快速检测法的优先使用 化学发光试剂 北京科美生物技术有限公司研制，国内第一个HIV抗体化学发光免疫试剂。国家性病与艾滋病中心对其与其他试剂进行的对照实验表明，化学发光诊断试剂盒具有更高的灵敏度，可以缩短窗口期。该研究项目是国家863计划重大传染病项目之一 。 原理：化学发光免疫测定技术酶免疫测定的一种，只是最后一步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。 检测标本：血液，检测对象：HIV抗体。 比传统ELISA灵敏度高。 需专门的发光检测仪 ，成本高，检测费用高于ELISA。 唾液检测试剂 尿液检测试剂 关于初筛检测试剂－－国家要求 我国对艾滋病试剂有何要求 ??? ?HIV抗体检测试剂分为初筛试剂和确认试剂（包括国产或进口）两种。两者都必须是HIV-1/2混合型，经国家药品监督管理局批准或注册，以及中国药品生物制品检定所批批检合格，并在有效期内。国家艾滋病预防与控制中心参比实验室每年对HIV抗体初筛诊断试剂进行临床评估，定期公布试剂评估结果。各HIV抗体检测实验室使用的试剂，必须具有国家药品监督管理局的批文和批批检报告，并选择评估质量优良的试剂盒。 筛查试剂的选择 检测目的 仪器设备条件 试剂的灵敏度特异性 经济条件 被测人群的特点 试剂的合法性 应用的普遍性和接受度 抗体初筛试验的局限性 HIV-Ab的确认实验 免疫印迹（ Western Blot,WB ）** 免疫荧光（IFA） 条带免疫(LIA) 放射免疫沉淀(RIPA) WB原理 HIV抗体WB实验的阳性判断标准 WB结果判断 中国标准 不同组织制定的标准 HIV抗体检测局限性 有些特殊人群可能抗体阴性，此时阴性结果不能排除H感染，包括：在感染早期，血清阳转前存在“窗口期”，在感染晚期，某些抗体可能检测不到（如p24抗体）。 目前通用的检测方法检测结果只表示感染，并不能确定具体感染时间。 结果除“阴性”、“阳性”，还有“HIV抗体不确定”。 不能诊断18月龄婴儿的母婴垂直感染。 有些特殊人群可能抗体阴性。 关于HIV-2的确认 首先通过HIV-1/2初筛和确认试剂中包被在固相载体上或喷涂在蛋白印迹膜上的gp36或gp105重组蛋白或合成多肽，初步检测病人是否感染HIV-2，再用HIV-2确认试剂进行确认，然后可再进行核酸检测和分析。 HIV-1O亚群的确认 O亚群的基因型与HIV-1M群和HIV-2有较大差异，常规的HIV-1M群和HIV-2试剂在检测O亚群阳性标本有较高的漏检率，一般的WB试剂检测也常为不确定结果，目前已有HIV1/2+O的确认试剂可检测O亚群，但没有单独的O亚群确认试剂。 P24抗原检测的主要用途 HIV早期感染辅助检测， 血液筛选， 小于18M婴儿HIV感染的辅助诊断， 监测治疗的效果和病程的进展， 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。 P24抗原检测的方法学 原理：一般用ELISA双抗体夹心法试剂 P24抗原的确认试验 P24抗原的定量检测 P24抗原检测存在的问题 敏感性低：30-50％ P24抗原检测的意义是有限的。 HIV-1 P24抗原检测，阳性结果必须经中和试验确认，该结果才可作为HIV感染的辅助诊断依据。 HIV-1 P24抗原检测阴性，只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。 方法：巢式PCR（nest－PCR）、逆转录PCR(RT-PCR) 样品：血细胞、全血、血清、血浆 Nested PCR的使用可以提高检