化学发光分析法介绍.ppt

化学发光（chemiluminescence）：又称为冷光，它是在没有任何光、热或电场等激发的情况下由化学反应而产生的光辐射。 一、基本原理 二、常见的化学发光剂 和化学发光体系 鲁米诺早在1853年就被合成出来了。1928年，化学家首次发现这种化合物有一个奇妙的特性，它被氧化时能发出蓝光。 刑侦学应用 在检验血痕时，鲁米诺与血红素（hemoglobin，血红蛋白中负责运输氧的一种蛋白质）发生反应，显出蓝绿色的荧光。这种检测方法极为灵敏，能检测只有百万分之一含量的血。 鲁米诺(luminol)（又名发光氨） 化学名称为3-氨基邻苯二甲酰肼。 常温下是一种黄色晶体或者米黄色粉末，是一种比较稳定的人工合成的有机化合物 化学式为C8H7N3O2 溶液显强酸性，对眼睛、皮肤、呼吸道有一定刺激作用。 合成 3-硝基邻苯二甲酸 + 肼 H2O + 3-硝基邻苯二甲酰肼 保险粉(强还原剂） 3-氨基邻苯二甲酰肼(鲁米诺) 发光体系 鲁米诺-H2O2体系 鲁米诺-KIO4体系 鲁米诺-H2O2的反应是自身化学发光反应 应用 直接作用：增敏和抑制作用 过渡金属：Cu2+,Cr3+,Ni2+,Co2+,Fe2+ 维生素B6，维生素B12，维生素C，吗啡，可待因，肾上腺素，多巴胺，细胞色素 间接作用 如 Fe2+对鲁米诺-H2O2体系有催化增敏作用，而蛋白质却抑制此作用，据此可建立检测血清中蛋白质含量的方法。 酶 在体系中加入辣根过氧化物酶等，利用其对底物的酶解并生成H2O2的反应，可测定酶含量、底物含量或H2O2含量。 鲁米诺-KIO4体系 催化作用 如Co2+,Mn2+,维生素C 1)利用该体系可测定样品中这些组分 2)利用Mn2+对该体系的催化作用来测定水中的IO4- 在免疫分析中的应用 将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原或抗体上 免疫反应复合物上的酶作用于发光底物 目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 酸性高锰酸钾 具有很强的氧化能力，可以与多种无机物和有机物进行氧化还原反应，但由于其反应的发光强度较弱，所以知道20世纪70年代以后，伴随着微弱光检测技术的发展才得到广泛的研究和应用。 LUM-F流动注射化学发光仪器 四、影响化学发光的因素 化学发光体系的选择 PH 反应体系中各试剂的浓度 样品溶液中的共存组分 （一）化学发光体系的选择 化学发光体系主要包括化学发光剂，与化学发光剂反应的试剂、催化剂、增敏剂、缓冲剂、溶剂等。 依据待测组分的性质，选择相适应的化学发光体系 化学发光反应多为氧化还原反应(1) 如果待测组分能直接与强氧化剂反应，可选择强化氧化性化学发光剂-待测物体系，如：KMnO4 -待测物、KIO4-待测物、Ce4+-待测物等。 依据待测组分的性质，选择相适应的化学发光体系 化学发光反应多为氧化还原反应(2) 如果待测物能够直接与H2O2反应或其参与的酶促反应改变了H2O2的含量，可选择鲁米诺- H2O2体系、草酸酯-过氧化氢-蒽类衍生物体系，或者光泽精- H2O2体系。 如果是建立新的发光体系，则以简单、高效为原则。首先考虑化学发光剂-待测物体系，确定测量波长。然后对体系的溶剂、缓冲剂进行筛选，最后再筛选催化剂和增敏剂。 （二）PH 不同的反应体系需要不同的PH条件，其最佳值可通过发光强度-pH的关系曲线确定。通过实验可以最终确定缓冲体系的组成，使体系的化学发光的强度相对较大。 （三）反应体系中各试剂的浓度 除待测物以外，反应体系中所有试剂都要通过发光强度—浓度的关系曲线找出最佳使用浓度范围，并最终确定各试剂的浓度。 （四）样品溶液中的共存组分 干扰组分对发光的影响可以是增敏的效果，也可以是猝灭的作用。通过干扰实验来检查和测定样品溶液中可能存在的，对化学发光有影响的干扰组分，寻找其消除方法。 五、定性定量分析 化学发光法是一种简便、快速、灵敏的痕量分析方法。在一定的条件下，化学发光体系的发光强度（或光量子数）与待测组分的浓度成正比。 对于成分简单的样品，eg:西药，通过标准曲线法、标准加入法等可直接对待测组分进行很好的定量分析。 但是在进行复杂样品分析的时候，由于发光体系的选择性很差，不能对待测组分很好的定性，使其在实际应用中受到了很大限制。 样品中待测组分测量分析的研究方向 利用耦合反应 利用标记技术 利用分离技术 耦合反应 耦合反应 选择性的测量待测组分的反应物，间接分析待测组分的含量。 酶反应由于其高度特异性而成为一种常用到的耦合反应。 电化学反应可在电极上选择性的生成某种电化学产物，也是可利用的耦合反应。