基因工程学原理内蒙古大学.pptVIP

环形重组质粒 质粒自我连接 线性载体或DNA片断进入细菌会被降解。 1）环形质粒数 （1）重组质粒 5. 影响转化率的因素 1）生长状态 制备感受态菌必须使用对数生长期的菌。 2）必须在冰冷的条件下制备。 4）储存感受态菌要在-70℃以下 3）CaCl2处理要充分 5）使用感受态菌时必须迅速融化 融化后一般不能再次冻存使用。 （2）感受态细胞 （competent cells) 把重组的噬菌体?DNA或Cosmid质粒DNA包装成具有感染能力的?噬菌体颗粒。 6. 体外包装的噬菌体的转导 （1）体外包装（in vitro packaging） （2）转导（transduction） 通过受体菌细胞表面的?DNA受体位点（receptor site)，使带有外源基因的重组体DNA注入受体大肠杆菌进行扩增。 第三节 外源基因导入真核细胞 外源基因被导入真核细胞后要求进入细胞核并整合到染色体上才能存留或得到表达。 一、导入酵母细胞 转化率高的菌株； 有突变的菌株（与导入的载体基因互补）； 不育的菌株（不会与其它酵母接合）。 1. 菌株选择 如：ura3-52, trp1-289, leu2-3, leu2-112, his3?1 （1）利用原生质球进行转化 2. 酵母的转化方法 原生质体 感受态 酶去壁 CaCl2 PEG PEG（聚乙二醇）、CaCl2使细胞膜具有通